Прижизненная окраска нормальных и поврежденных клеток, страница 3

Удобными объектами для исследования являются тонкие пленки растительных и животных тканей, форменные эле менты крови (эритроциты, лейкоциты), изолированные железы личинок насекомых (хирономуса, дрозофилы), роговица лягушки, отпечатки клеток печени и др. Для изучения растительных клеток можно рекомендовать так называемую плаценту или пленку, одевающую семя подсолнечника. После слабого размачивания сухого семени она легко снимается и может быть подвергнута любым цитологическим исследованиям.

Очень удобным материалом для исследования  живых клеток являются культуры животных и растительных тканей и особенно культура лейкоцитов. Преимущество метода культуры тканей заключается в том, что клетка в условиях культуры оказывается в более благоприятных условиях, чем в условиях так называемого «переживания". Это дает возможность вести длительные, не ограниченные временем, наблюдения. Наконец, в условиях культуры легче найти место, где клетки расположены в один слой, что является идеальным для тонких наблюдений и при значительных увеличениях.

В качестве приборов, которые применяют для исследования живых клеток, следует назвать обычный микроскоп и ряд его модификаций — изучение препаратов с применением темного поля, фазовоконтрастного устройства, интерференционного и аноптрального микроскопов. Исключительно интересным для исследования живых клеток является применение люминесцентного микроскопа.

Проведение работы с живыми "переживающими" клетками требует соблюдения определенных мер предосторожности, гарантирующих нормальное состояние клетки. Животные клетки обычно изучаются в рингеровском или в рингер-локковском солевом растворе или, наконец, в капле кровяной плазмы того животного, от которого взята исследуемая ткань. Растительные клетки обычно изучаются в водопроводной воде или в растворах сахара- Окрашивание производится в чашках Петри при температуре воздуха 20— 25"С и при определенной концентрации красителя, которая устанавливается экспериментальным путем, индивидуально для каждой ткани (примерное разведение красителя 1:1 000; 1:5 000 и т. д.).

С первых же минут контакта красителя с тканью в цитоплазме неповрежденных клеток постепенно образуются мелкие гранулы в виде зерен, капелек. С течением времени количество гранул и их размеры увеличиваются. Ядро остается при этом неокрашенным. В поврежденных клетках цитоплазма и ядро окрашиваются диффузно.

Весьма интересным и перспективным является метод двойной витальной окраски, разработанный   на кафедре биологии (И. Е. Камнев, Л. Ф. Гордеева, 1959). Этот метод заключается в том, что ткани окрашиваются нейтральным красным в сочетании с азуром I.

Оптимальные концентрации для различных тканей оказались различными. Так, для эпителия роговицы лягушки лучшими оказались нейтральный красный в концентрации 0,05% и азур 1 — 0,1%. Растворы этих красителей готовятся отдельно на дистиллированной воде, а затем перед экспериментом сливаются вместе в соотношении 10 частей нейтрального красного и 3 части азура I, после чего смешиваются с равным количеством двойного солевого раствора Рингера. Преимущество этого метода заключается в том, что в результате такого окрашивания возникает четко видимая разница между нормальными и поврежденными клетками. Цитоплазма интактных клеток почти бесцветна и содержит большое количество гранул нейтрального красного,  а поврежденные клетки диффузно окрашиваются азуром 1 в синий цвет.

Использование витальных красителей дает возможность судить как о субстанциональных изменениях исследуемых клеток, так и об их функциональном состоянии.  Причем, это окрашивание позволяет выявить такие тонкие начальные изменения, которые не обнаруживаются другими методами. Поэтому метод прижизненной окраски нашел широкое применение для решения и трактовки ряда как общетеоретических, так и прикладных вопросов.

ТЕМЫ ДЛЯ ДОКЛАДОВ

1. Прижизненные, или витальные, методы исследования и значение их в биологии и медицине.

2. Паранекроз и его биологическая сущность.

ЛИТЕРАТУРА

1. Камнев И. Е. Пособие по общей цитологии.   Часть I,  1968. часть П. 1969.

2. Руководство по цитологии под ред. Л. Н. Жинкина и П. П. Румянцева', 1965.