Определение β-глюкана в зерне с фотометрическим окончанием
Водный экстракт β-глюкана из измельченного инактивированного ячменя подвергают солянокислому гидролизу. В полученном гидролизате любым методом определения редуцирующих сахаров [например, с помощью 3,5-динитросалициловой кислоты (ДНСК)] устанавливают концентрацию глюкозы.
Метод определения состоит в том, что редуцирующие сахара восстанавливают ДНСК до производных красно-бурого цвета, и чем больше в растворе глюкозы, тем интенсивнее будет цветность раствора.
Ферментативный метод (метод ЕВС 4.16.1)
Содержание в солоде высокомолекулярного β-глюкана этим методом определяют так же, как и в ячмене, на для удаления с поверхности зерен свободной глюкозы и низкомолекулярных β-глюкоолигосахаридов образцы солода предварительно промывают 50 %-ным этанолом.
Отличия этого метода от определения биополимера в ячмене заключаются в следующем. К навеске точно взвешенной тонкоразмолотой солодовой муки массой около 1,0 г добавляют 5,0 см3 водного 50%-ного раствора этанола и 5 мин выдерживают пробу в кипящей водяной бане. При перемешивании добавляют 5,0 см3 50%-ного этанола. Центрифугируют 10 мин при 1000 мин-1 и удаляют надосадочную жидкость. Осадок размешивают в 10,0 см3 50-%ного этанола, снова центрифугируют и удаляют надосадочную жидкость. Суспендируют осадок в 5,0 см3 0,02-молярного раствора фосфата натрия с рН 6,5. Далее операции выполняют так же, как и для ячменя, начиная со стадии инкубации с лихеиназой. В солодовом сусле содержится 40…760 мг/дм3 β-глюкана.
1.5.2. Определение высокомолекулярного β-глюкана в сусле
β-глюкан в сусле можно определять аналогично методике определения этого показателя для ячменя.
Ферментативный метод ЕВС 8.13.1
Используют для определения фракции высокомолекулярного β-глюкана, имеющего 1,3- и 1,4-связи. Метод основан на использовании чистых глюкангидролаз. Сначала из сусла сульфатом аммония осаждают высокомолекулярный β-глюкан и затем перед гидролизом лихеиназой и β-глюкозидазой промывают его 50%-ным водным раствором этанола. Для получения порошкообразного сульфата аммония кристаллический аммоний размалывают в кофемолке до тонкой муки.
Методика осаждения высокомолекулярного β-глюкана такая же, как для ячменя, с некоторыми особенностями.
Для инкубирования лихеиназы осадок диспергируют в фосфатном буфере с рН 6,5, и, доведя объем до известного объема, добавляют лихеиназу (активностью 10 U) и инкубируют суспензию 5 мин при 40 0С. Охлаждают до комнатной температуры, после чего образец центрифугируют 10 мин при 1000 мин-1.
Инкубация β-глюкозидазы. Из надосадочной жидкости по 0,2 см3 аккуратно вносят в три пробирки. В одну из них (холостой опыт) добавляют 0,1 см3 0,050 моль/дм3 ацетатного буфера с рН 4,0, в то время как в две другие добавляют по 0,1 см3 β-глюкозидазы (активностью 0,2Uв 0, 05 моль/дм3 ацетатном буфере с рН 4,0). Выдерживают пробирки 20 мин при 400С.
Определение глюкозы. В каждую пробирку вносят по 3,0 см3 глюкооксидазно-пероксидазного реагента с интервалом 30 с и выдерживают при40 0С 15 мин. В каждом образце в той же последовательности измеряют оптическую плотность при 500 нм.
Замечания по анализу сусла. Объем проб перед внесением глюкооксидазно-пероксидазного реагента должен быть точно 0,3 см3, поэтому и растворы глюкозного стандарта, и холостого опыта должны быть по 0,3 см3.
Для образцов, имеющих высокое содержание β-глюкана, берут меньшее количество пробы (0,1 или 0,05 см3). После реакции с β-глюкооксидазой конечный объем доводят ацетатным буфером 0,050 моль/дм3 (рН4,0) до 0,3 см3.
1.5.3. Определение содержания высокомолекулярного β-глюкана в пиве
Энзиматический (ферментативный) метод ЕВС 9.31.1
Этот метод применим ко всем типам пива. При исследовании пива с низким содержанием β-глюкана (ниже 100 мг/дм3) могут быть искажения результатов вследствие неполного осаждения β-глюкана.
При исследовании пива используют ту же методику, что и при анализе сусла (п. 6.2.12). Для этого образец пива для освобождения от диоксида углерода нагревают до 80 0С в кипящей водяной бане, затем охлаждают.
Флуориметрический метод ЕВС 9.31.2
Методприменим ко всем типам пива, но его следует с осторожностью применять при исследовании темного пива цветностью более 20 ед. ЕВС, для которого содержание β-глюкана может быть занижено из-за больших значений оптической плотности, обусловленных высокой цветностью.
Следует использовать методику, описанную для сусла 9.31.2, но подготовку образца ведут следующим образом. Около 25 см3 пива наливают в стакан, который помещают в ультразвуковую баню на 10 мин. Можно внести также элемент от магнитной мешалки, поставив стакан на магнитную мешалку и удалив газ перемешиванием в течение 30 мин.
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.