Одним из таких способов является сорбция микробного антигенана эритроцитах барана или частицах латекса. Такой диагностический пре-парат называется эритроцитарным диагностикумом или латекс-диагности-кумом. В данном случае имеющийся водорастворимый антиген становит-ся водонерастворимым, благодаря его связыванию с эритроцитом. Соот-ветственно, такая серологическая реакция называется реакцией пассивнойгемагглютинации (латекс-агглютинации) – РПГА.
Количественной характеристикой присутствия антигенспецифических антител является титр антител. Титр антител – это максимальноеразведение исследуемого материала, дающее положительный результатсерологической реакции. Титр Ат (или Аг) выражаетсяразведением ис-следуемого материала, например, 1:16, 1:250 и т. п.
Диагностический титр – это титр антител, характерный для большинства случаев конкретного инфекционного заболевания, определя-емый на пике гуморального иммунного ответа. Диагностический титропределяется путем многочисленных исследований, выполняемых на ба-зах различных лабораторий.
Для определения титра антител нужно перед постановкой сероло-гической реакции приготовить ряд разведений исследуемого материала.
При приготовлении разведений сыворотки крови используют растворэлектролита (чаще всего изотонической раствор хлорида натрия). Шагразведения (титрования) задается соотношением объема раствора электролита и объема сыворотки крови. Например, при последовательных разве-дениях с шагом в 2 раза в 1-й пробирке смешиваются равные объемы раствора электролита и сыворотки крови, при шаге в 5 раз к 4-м объем-ным частям раствора электролита добавляют 1 объем сыворотки, при шагев 10 раз – к 9 объемам раствора электролита добавляют 1 объем сыво-ротки крови. Процесс приготовления разведений сыворотки крови обычно проводится в пробирках или круглодонных планшетах (или стрипах).
После титрования исследуемой сыворотки крови в лунки стрипа вносят диагностикум. Затем проводят инкубацию в необходимом режиме и учитывают результат реакции визуально.
Методы изучения противоопухолевого иммунитета
Принцип методов ИХА основан на обратимой реакции взаимодействия антигена – АГ (лиганда) со специфическим антителом (АТ) –связывающим агентом – с последующим образованием растворимогокомплекса «антиген-антитело», которая подчиняется закону действующихмасс. Условия реакции подбираются таким образом, что добавляемый всистему меченый АГ (АГ*) конкурирует с немеченым АГ за ограниченное число мест связывания на антителах. Согласно закону действующих масс,количество связанного с АТ меченого АГ находится в обратной зависимо-сти от количества немеченого (анализируемого антигена). После установ-ления равновесия в аналитической системе свободную и связанную фракции разделяют и измеряют активность одной из них.
Наиболее распространенными средствами ИХА являются методыРИА и ИФА, которые являются родственными и отличаются друг от другалишь типом используемой метки (радиоизотоп в РИА; фермент в ИФА) испособом детекции результатов реакции (радиоизотопный счетчик для
РИА; иммуноферментный анализатор (или спектрофотометр) для ИФА).
93.Методы исследования функциональной активности фагоцитов.
Для определения активности фагоцитарных клеток используют ряд реакций, основанных на контроле разных этапов фагоцитоза, а также оценке основного эффекта фагоцитарной реакции, а именно – определение численности клеток, способных к фагоцитозу и количества поглощенных объектов фагоцитоза.
В основе определения фагоцитарной активности фагоцитов – биологический метод, предполагающий смешивание суспензии клеток-фагоцитов и объектов фагоцитоза. После инкубации этой суспензии (время определяется конкретными условиями и особенностями фагоцитов) осуществляется регистрация результатов.
Общая схема исследования фагоцитоза
Выбор клеток-фагоцитов: Как известно, клетками-фагоцитами являются нейтрофилы и макрофаги. Поскольку для макрофагов характерна тканевая локализация, то использование их в качестве клеток-фагоцитов не представляется возможным. Поэтому основной популяций фагоцитов, используемых для научных исследований и для иммунодиагностики, являются нейтрофилы периферической крови.
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.