Оценка влияния ионизирующего излучения на состояние белкового и липидного компонента биологических мембран, страница 4

1.  Определить концентрацию тимоцитов в выделенном тимусе (млн/мл). данные занести в таблицу 1.

Таблица 1.

№ п/п

Количество подсчитанных клеток

Количество клеток в рабочем растворе

Количество клеток в 1 мл исходной суспензии

1.

контроль

2.

облучение

2.  Определить исходные параметры спектров флуоресценции пирена. Данные занести в таблицу 2.

Таблица 2.

№ п/п

Интенсивность флуоресценции, отн. ед.

286 нм

337 нм + пирен

286 нм + пирен

330

373

385

393

470

330

373

385

393

470

1. контроль

2.

облучение

3. На основании результатов, приведенных в таблице 2, произвести расчет показателей, характеризующих структурное состояние мембран, исходя из следующих  соотношений:

1. Полярность аннулярного липида при lвоз= 286 нм   I385/I373;

2. Полярность липидного бислоя при lвоз= 337 нм   I385 /I373;

3. Микровязкость аннулярного липида при lвоз= 286 нм   I475/ I373;

4. Микровязкость липидного бислоя    при lвоз= 337 нм  I475/ I373;

5. Степень тушения белковой флуоресценции пиреном: 

Полученные данные занести в таблицу 3.

Таблица 3.

показатели

Условия

Полярность аннулярного липида

Полярность липидного бислоя

Микровязкость аннулярного липида

Микровязкость липидного бислоя

Степень тушения белковой флуоресценции пиреном, %

1.

контроль

2.

облучение

4. На основании данных таблицы 3 построить диаграмму, иллюстрирующую влияние ионизирующего излучения на структурное состояние белкового и липидного компонента мембран тимоцитов. По оси Y откладывать величину признака в относительных единицах, по оси X – варианты экспериментов.

5.  На основании полученных данных сделайте вывод о степени чувствительности компонентов биологической мембраны к действию ионизирующего излучения и о степени выраженности этого эффекта при различных типах радиационного воздействия. Обсудите полученные результаты с преподавателем.

Рекомендуемая литература.

1.  Рыскулова С.Т. Радиационная биология плазматических мембран.Москва Энергоатомиздат.-1986.-126с.

2.  Болдырев А.А.  Биологические мембраны и транспорт ионов. – М.: Изд-во Моск. Ун-та, 1985.-208с.

3.  Геннис Р. Биомембраны: Молекулярная структура и функции: Пер. с англ. – М.: Мир, 1997. – 624 с.

4.  Биохимия мембран: Учебное пособие для биологических и медицинских спец. вузов / Под ред. Болдырева А.А. Кн. 1. Болдырев А.А. Введение в биохимию мембран. – М.: Высш.шк., 1986. – 112 с

5.  Сунгуров В.А. Влияние ионизирующего излучения на клеточную поверхность. Москва: Наука .-1988.-259с.

6.  Бурлакова Е.Б. Новые аспекты закономерности действия низкоинтенсивного облучения в малых дозах // Радиационная биология ,Радиоэкология .- 1999.-Т. 39.-Вып.-1.-С.26-34.

7.   Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в иследовании клеток, мембран и липопротеинов. -  М.: Наука, 1989. – 270с.

8.  Богач П.Г. и др. Структура и функция биологических мембран / Учебное пособие. Киев: Вища школа. 1981. 336с.

9.   Текучесть мембраны в биологии: Концепции мембранной структуры / Под ред. Р. Элоя; Пер. с англ.: З.В. Линевич. Киев. 1989. 303с.

10.  Крепс Е.М. Липиды клеточных мембран. – Л.: Наука, 1981. – 330с.