определения иммуноглобулинов класса G к структурным и неструктурным белкам вируса гепатита С - "ИФА-анти-HCV-спектр" (НПО Диагностические системы, г. Нижний Новгород).
Постановка реакций осуществляется в соответствии с инструкциями к вышеуказанным тест-системам.
Подтверждающие тесты. Несмотря на высокую специфичность, современные ИФА-системы не гарантированы от гипердиагностики, т.е. от ложноположительных результатов. Для подтверждения наличия антител к вирусу гепатита С в образцах сыворотки с первично положительным результатом ИФА проводится постановка ИФА с раздельным определением антител к различным белкам вируса, а также постановка иммуноблоттинга. Принцип иммуноблотинга основан на определении антител к дискретным антигенам, которые в виде фракций-«пятен» (англ. blot—пятно) фиксируются на нитроцеллюлозных полосках и после инкубации с исследуемой сывороткой проявляются мечеными антителами точно так же, как в «обычном» иммуноферментном анализе. В 3-м поколении иммуноблотинговых систем используются рекомбинантные и/или синтетические пептиды, кодируемые С, NS3, NS4 и NS5 ВГС -генами. Результат считается положительным при выявлении антител к двум и более антигенам.
В соответствии с приказом МЗ РФ №282 от 28. 09.1998г. с этой целью применяются следующие тест-системы:
"Рекомби-Бест анти- ВГС подтверждающий тест - ЗАО "Вектор-Бест", г. Новосибирск.
"HCV Blot 3,0-диагностикум" - General diagnostic", Сингапур.
Desiscan HCV+" - "Sanofi Diagnostics Pasteur", Франция.
Постановка реакций проводится в соответствии с инструкциями к вышеуказанным тест-системам.
Интерпретация результатов.
Антитела к вирусу гепатита С впервые могут быть обнаружены через 10-14 дней после начала заболевания. В первую очередь определяются антитела класса М к структурному белку С (core). В дальнейшем дифференцированное выявление антител к различным вирусным белкам позволяет определить фазу заболевания. В острой фазе гепатита С через 2 - 3 недели после появления анти- HCV -IgM к С-белку в сыворотке крови начинают выявляться анти- HCV IgG к С-белку. При этом не удаётся определить анти- HCV-IgG к неструктурным (NS) белкам. Латентная фаза гепатита С характеризуется наличием анти- HCV-IgG как к структурным, так и неструктурным белкам при отсутствии анти- HCV-IgM. В фазе ре-активации при сохранении анти- HCV-IgG к С-белку и NS-белкам вновь начинают определяться анти- HCV-IgM. В сыворотке крови реконвалесцентов могут длительное время присутствовать анти- HCV-IgG к С-белку при отсутствии анти- HCV-IgM. При гепатите С иммунный ответ развивается медленно. Поэтому у некоторых больных острым гепатитом сомнительный результат (выявление антител к единственному HCV-пептиду) может со временем смениться на положительную реакцию. В таких случаях требуется уточнение диагноза при помощи теста на HCV-PHK вирусемию.
HCV-PHK
Известны по меньшей мере три ситуации, когда антительные тесты не выявляют HCV-инфекцию, т.е. оказываются ложноотрицательными. Это бывает:
(1) в серонегативной фазе острого гепатита (первые несколько месяцев после заражения),
(2) у больных, получающих иммунодепрессанты (они могут быть длительно инфицированы без сероконверсии)
(3) при заражении некоторыми генотипами (прежде всего 3 и 4).
Перечисленные недостатки меньше проявляются с тест-системами 2-го и особенно 3-го поколений. Они дополнены эпитопами высокоиммуногенных и консервативных антигенов, что позволяет улавливать более ранний (слабый) иммунный ответ. Вместе с тем, учитывая недостатки даже самых совершенных методов выявления анти-HCV, иногда требуются прямые доказательства присутствия вируса в организме. Такая необходимость возникает и в связи с проблемой неопределенных результатов иммуносерологического анализа, в том числе
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.