Выделение чистой культуры и ее идентификация

Министерство образования и науки Российской Федерации

Новосибирский Государственный Университет

Факультет естественных наук

Отчет

Выделение чистой культуры
 и ее идентификация

Выполнила:

Безуглова Анна Михайловна

Руководитель:

К.б.н. Ильичёва Татьяна Николаевна

Новосибирск, 2007

Цель

7.03.2007

Получение накопительной культуры. Накопительной называют культуру, в которой преобладают представители одной физиологической группы или даже одного вида микроорганизмов. Метод заключается в создании элективных, т.е. условий, которые обеспечивают преимущественное развитие желаемых бактерий. Субстрат (№) помещаются в пробирку с питательной средой – 1 % молоко инкубируют 7 дней, 36 °С

14.03.2007

Молоко свернулось, значит, произошло размножение молочнокислых бактерий.

Выделение чистой культуры методом истощающего штриха:

          После получения накопительной культыры, приступают к выделению чистой культуры. Основным методом выделения чистых культур до настоящего времени, является метод предложенный Кохом. Принцип его заключается в получении потомства одной клетки.

Чашка Петри с агаризованной средой делится на четыре сектора (Рис 1 а). Микробиологической петлей с накопительной культурой в первом секторе проводится штрих (Рис 1 б), после чего петля прокаляется, затем этот штрих перечеркивается и проводится такой же во втором секторе (Рис 1 в). Эти действия повторяются для третьего и четвертого сектора (Рис 1 г). Петля не должна оставлять царапин на агаре.

Рис 1.

                     1      2

                     4      3 

             а                             б                          в                          г

          После посева чашки помещают в термостат крышками вниз, чтобы конденсирующаяся вода не попала на поверхность агара. Чашки выдерживаются в термостате в течение семи суток.

21.03.2007

В 1, 2, 3 секторах выросло много колоний, в  четвертом – три. Одна из этих колоний пересаживается на новую чашку. (Рис 2) для накопления биомассы бактерий.

Рис 2.

          Наблюдается однородный рост бактерий по штриху – это один из критериев чистоты культуры.

28.03.2007

Морфологические характеристики:

1.  Препарат фиксированных окрашенных клеток морфологически однороден – это еще один показатель чистоты культуры.

2.  Окрашивание по Граму (проводится в присутствии культур-свидетелей (грамположительных и грамотрицательных)).

3   Исследуемая культура грамположительна.

4.  Форма бактерий палочковидная.

5.  Тест на дыхание

Бактерии высевают в столбик расплавленной и остуженной агаризованной средой (температура 40-45° С) в среднюю часть  вносится культура, тщательно перемешивается.

          Исследуемая культура – факультативный анаэроб, поскольку клетки распределены по столбику равномерно.

4.  Тест на споры (пастеризация). Пастеризацией убиваются только вегетативные формы микроорганизмов. В отличии от них споры обладают высокой термоустойчивостью и после пастеризации остаются жизнеспособными. Чашку Петри делят на четыре части. Готовят суспензию клеток исследуемой культуры и контроля (34 культура). Наносят стеклянной пипеткой в сектор агара. Затем обе культуры выдерживают при температуре 80° С в течение 10 минут. После чего обе культуры наносят в соответствующий сектор. Рост должен быть в 1, 2, 4 секторах, третий сектор говорит о том, образует ли культура споры. (Рис 3)

Рис 3.

Исследуемая культура – спорообразующая.

5.  Тест на каталазу:

          Каталаза катализирует разложение перекиси  водорода на воду и кислород:

2H₂O₂ → 2H₂O+O₂

В каплю 3 % перекиси водорода не металлическим предметом переносятся бактерии. В случае присутствия каталазы происходит выделение пузырьков газа.

          Культура каталазоотрицательна, поскольку нет выделения газа

Идентификация:

Хемотрофы

             Хемоорганотрофы

               Скольжения нет

                     Клетки не нитевидные

                       Клетки ригидные

                            Грамположительные

                               Образуют эндоспоры Þ Сем. Bacillaceae

                                    Палочковидные

                                         Факультативные анаэробы и микроаэрофилы, каталазу не образуют Þ SporolactobacillusInulinus.

Вывод:

Выделена чистая культура микроорганизмов, поскольку:

1.  На чашке Петри по штриху выросли одинаковые колонии.

2.  Под микроскопом видно, что все клетки одинаковые.

3.  В столбике с агаром клетки одинаковые и равномерно распреднленные по всему обьему.

4.  Удалось идентифицировать культуру.