Коагулограмма. Наиболее часто применяемые тесты для исследования гемостаза

Коагулограмма.

Наиболее часто применяемые тесты для исследования гемостаза:

1. Время свёртывания венозной крови по Ли-Уайту – это время образования сгустка в одном миллилитре нативной венозной крови больного в стеклянной пробирке при 37C в норме 5-8 минут. Это ориентировочный общекоагуляционный тест, т.е. характеризует систему свёртывания крови в целом при нормальных показателях этот тест даёт информацию о том, что ПТИ больше 30%, фибриноген больше 1 г/л.
2. Время рекальцификации плазмы – это время свёртывания плазмы больного (полученной из крови, стабилизированной раствором цитрата натрия) при добавлении к ней раствора хлористого кальция. В норме 120-150 сек.  Это является ориентировочным общекоагуляционным тестом.
3. Активированное время рекальцификации – это время свёртывания плазмы больного (полученной из «цитратной» крови) при добавлении навески каолина (каолин – белая глина, это поверхностно-активное вещество, применяемый для контактной инактивации свёртывания с целью более точного выявления нарушений в фазах свёртывания крови) после рекальцификации добавлением хлористого кальция. В норме 60-80 сек. Является точным и чувствительным методом.
4. Определение содержания фибриногена по Р. Л. Рутбергу. Метод основан на рекальцификации одного миллилитра цитратной плазмы и взвешивании образовавшегося сгустка фибрина (после отжатия из него жидкой фазы). Вес такого сгустка в норме 9-18 мг., что по калибровочным кривым соответствует концентрации фибриногена 2-4 г/л.
5. Паракоагуляционные тесты (В – нафтоловый, этаноловый, протаминсульфатный) – выявляет наличие в крови больного РКМФ (растворимый комплекс мономеров фибрина – это комплекс мономеров и частичных полимеров (неполных), растворимых в воде, старое название флобриноген В). Наличие РКМФ в крови говорит о возможности или присутствии тромбонов либо ДВС. К цитратной плазме больного добавляют соответствующий реактив (В – надолол, протаминсульфат или 50%-ы й этанол). При наличии РКМФ мономеры фибрина высвобождаются, действие свёртывающих компонентов плазмы полимеризует эти мономеры с образованием сгустка. В норме РКМФ в крови нет, поэтому в процессе теста сгусток не образуется.
6. Фибриноген В – это РКМФ. В норме отсутствует. При его наличии, выражаемом плюсами, имеется гиперкоагуляция, с возможным или явным тромбозом.
7. Протромбиновое время (синоним – протромбиновый индекс) – это время свёртывания цитратной плазмы после внесения в неё стандартного раствора тромбопластина и хлористого кальция. Характеризует активность VII, X, V, II факторов протромбинового комплекса, которые является витамин К - зависимым. Поэтому тест широко применяется для контроля терапии непрямыми антикоагулянтами (антивитаминами К). При применении высокоактивного стандартного тромбопластина результат выражают в секундах (в норме 12-15 с.), но в связи с несоответствием большинства отечественных тромбопластинов стандарту результат выражают относительно в процентах или единицах протромбинового времени плазмы. Норма 80-100% или 0,8-1,1. Выше 110% результат быть не может, иначе это ошибка лаборатории.
8. Активированное частично (парциально) тромбопластиновое время – АЧТВ и АПТВ – синоним каолин-кефалиновое время плазмы. Кефалин – взвесь фосфолипидов, необходимых для свёртывания крови. Так же как и каолин, кефалин применяется для сокращения свёртывания в тесте, следовательно, для стандартизации и повышения точности теста. В данном случае в цитратную плазму до рекальцификации вводят навеску каолина (каолиновое время 60-70 сек.) и кефалин (кефалиновое время (если вводят только кефалин) синоним парциальное тромбопластиновое время, норма 55-56 сек.). В норме АЧТВ (т.е. с добавлением каолина и кефалина) – 35-45 сек. Кефалин является заменителем тромбоцитарного фактора 3. Тест весьма чувствителен к плазменным дефектам (дефицит XII, XI, IX, VIII, а так же к избытку антикоагулянтов). При лёгкой гипокоагуляции АЧТВ – 50-60 сек., средняя – 80-90 сек., выраженная более 90 сек. При гиперкоагуляции АЧТВ – менее 30 сек.
9. Определение количества тромбоцитов в крови. В норме (180-320)*10^9/л. Считают  в камере или в мазке.
10. Определение времени кровотечения (по методу Дьюка, Борхгревинна, Айви и др.). Это время кровотечения из раны на нож (прокол или небольшой разрез-царапина) при обычном венозном давлении или при накладывании на плечо манжетки, в которой создаётся давление 40 мм рт.ст. Норма до 5 минут (при накладывании манжетки до 8 минут). Характеризует суммарное состояние сосудисто-тромбоцитарного гемостаза.
11. Тромбоцитарное время свёртывания плазмы. Это время свёртывания нормальной плазмы при добавлении раствора тромбина в равных объёмах. Даёт представление о состоянии ___________ этапа свёртывания. В норме 14-16 сек. При гиперкоагуляции – укорачивается, при гипокоагуляции – удлиняется.
12. Аутокоагуляционный тест. 0,1 мл цитратной крови больного смешать с двумя мл 0,222% гипотонического раствора CaCl2 образуется гемолизат – кальциевая смесь, в которой начинается процесс активации протромбина и превращения его в тромбин. К плазме больного добавляют этот гемолизат в разные сроки (2-й, 4-й,6-й, 8-й, 10-й, 20-й, 30-й, 40-й, 50-й, 60-й минутах или чаще только на 8-й и 10-й минутах). Строят график, который показывает нарастание активности тромбопластина и тромбина, а так же скорость инактивации тромбина антитромбинами и продуктами фибринолиза.

           Характеризует гипокоагуляцию в норме на 8-й и 10-й мин. 7-11 сек.

13  Антитромбин III – первичный антикоагулянт плазмы крови. Исследуемая плазма дефибринируеттся (прогреванием, змеиным ядом или другими способами), затем добавляют стандартное кол-во тромбина (можно добавлять активированный фактор Xа, который так же блокируется антитромбином III ,-это вариант метода). Смесь инкубируют при 37С, а затем тестируют на растворе фибриногена или адсорбированной плазме через каждые 3 мин. в течении 9 мин. Об уровне антитромбина III по ослаблению свертывающей активности тромбина (количественное определение по калибровочной кривой). В норме 90-100 %. Гепарин действует только в присутствии антитромбина III (при соединении с ним).

14  Толерантность плазмы к гепарину - это время свертывания цитратной плазмы  при внесении в нее небольших количеств гепарина и последующей рекальцификации. В норме 5-7 мин. Это общекоагуляционный тест, но более чувствительно отражает наклонность к тромбообразованию, при этом тест менее 5 мин., что по-видимому связано со снижением антитромбина -III.

15  Ретракция кровяного сгустка - это часть жидкости, отжатой сгустком при сокращении от количества плазмы. В норме 65 – 85 %. Менее 65% - сгусток дряблый, более 65% - плотный. Тест весьма неточен, малоинформативен, зависит от качества стекла и других лаб. принадлежностей,  а так же биохимических показателей крови.

16  Спонтанный фибринолиз  - это кол-во эритроцитов, выпавших из сгустка в процессе ретракции и лизиса, т.е. «мера спонтанной разрушаемости сгустка» при инкубации 37С 2 часа, (можно 3 часа). Метод  неточен, неверен, т.к. показано, что формирование осадка _____________ эритроцитов не связано с фибринолизом. В норме 10-20%

17  Эуглобулиновый метод определения фибринолитической активности (син-эуглобулиновый тест). Это время растворения сгустка эуглобулинов, осажденных из исследуемой плазмы уксусной кислотой и свертываемых хлористым кальцием (или тромбином). По способу Коваржика-Булука: в кислой среде при низкой температуре осаждается эуглобулиновая фракция(это плазминоген, его активаторы, факторы свертывания, фибриноген). В осадок выпадают ингибиторы фибринолиза в очень малом количестве. Эуглобулиновую фракцию растворяют, затем вызывают в ней свертывание (добавлением  хлорида Са или тромбина), определяют время лизиса полученного сгустка при 37С. В норме 3-4 часа(2-4, в среднем 3 часа). При повышении фибринолитической активности лизис ускоряется, при дефиците плазминогена и его активаторов замедляется. Используется методика для определения активности фибринолитической системы.

18  Клинические пробы щипка, жгута, баночная проба Нестерова. Показывают состояние проницаемости сосудистой стенки под влиянием относительно дозированного воздействия (щипок кожи, наложение жгута на плечо, присасывающее действие «банки» при разряжении воздуха в ней). Дают грубую, но часто важную информацию о состоянии сосудисто-тромбоцитарного гемостаза. Результат оценивают по количеству петехий, появляющихся на исследуемом участке кожи после механического воздействия.