Фотометрические методы исследования. Устройство и принцип работы спектрофотометра, страница 16

Т^рбидиметр Behring Turbidimer концерна DADE — Behring (США. Германия)

Полуавтоматический анализатор — турбиди-метр для определения специфических белКпв в сыворотке, моче и цереброспинальной жидкости. Производительность прибора от 20 до 50 тестов в час. Автоматическая обработка данных с выводом на печать. Возможность подключения к персональной ЭВМ через интерфейс RS 232C.

Как уже отмечалось выше, в то время как для нефелометрических исследований требуется специально спроектированный для этих исследований прибор — нефелометр, турбидиметричес-кие исследования могут быть выполнены с помощью универсального спектрофотометра или на большинстве клинических автоматических анализаторов.

Флуориметрическии анализ

Если световая энергия, поглощенная атомами или молекулами, отдается ими в виде светового же излучения, то такое явление называется флуоресценцией.

Спектр излучения флуоресценции многих веществ носит избирательный характер.

Как и в случае спектров поглощения, избирательность обусловлена структурой и составом излучающего вещества. Спектры излучения растворов при флуоресцентных измерениях состоят, как правило, из широкой полосы с максимумом при некоторой длине волны. Кроме веществ, дающих широкие полосы излучения, встречаются вещества с хорошо выраженной колебательной структурой спектра.

Спектр излучения не зависит от длины волны возбуждающего света. Это правило показывает, что спектр флуоресценции характеризует исследуемое вещество и является основой для обнаружения и идентификации этих веществ.

Рис. 3.41. Рассеяние света при различных соотношениях размера частиц d и длины волны электромагнитного излучения.

Рис. 3.42. Направление световых потоков при i фелометрии.

1 — источник световой энергии; 2 — полосов фильтр; 3 — кювета; 4 — фотоприемник; Фо — г дающий поток световой энергии; Фр — поток светов энергии, рассеянный жидкой дисперсной систем! ДХ — полоса пропускания светофильтра

Вторым правилом является правило Сток-са, согласно которому спектр флуоресценции и его максимум по сравнению со спектром абсорбции смещен в сторону больших длин волн.

Например, растворы, облученные световой энергией в ультрафиолетовом диапазоне, могут флуоресцировать любым светом, а растворы, флуоресценция которых возбуждается зеленым светом, не могут светиться фиолетовым и синим, а только желтым и красным, словом, таким светом, который соответствует большим длинам волн.

Для большинства веществ кривые спектров излучения и поглощения перекрываются.

Количественное преобразование возбуждающей энергии в энергию флуоресценции определяется выходом флуоресценции.

Существуют понятия энергетического и квантового выходов.

Квантовым выходом (Вцв) флуоресценции называется отношение числа излученных кван-^(^A^W, w^rq^w^ak <^\.

^к»-^!^.

Энергетическим выходом (В,) называется отношение излученной энергии (Е„) к энергии по. глощенной (Ед):

В,= Е„/Еп.

Так как энергия каждого кванта равна h'v, то между энергетическим и квантовым выходами будет существовать соотношение:

В, = Е„/Еп = N„-trv„ / Nn-h-Vn =

1           = Вкв- v„/Vn = Вкв-^-п / ^-и. - где

i    ^ — частота максимума в спектре поглощу ; ния;

vh — частота максимума в спектре излучи ния (флуоресценции);

Рис. 3.43. Схема, иллюстрирующая направления светового потока при турбидиметрии. 1 — источник световой энергии (лампа накаливания, импульсная лампа); 2 — полосовой фильтр, в некоторы) случаях фильтр отсутствует, и измерение проводится в «белом» свете; 3 — кювета; 4 — фотоприемник; Ф„ -\ падающий поток световой энергии; Фр — поток световой энергии, рассеянный жидкой дисперсной системе^ ф — поток световой энергии, прошедший раствор; ДХ, — полоса пропускания светофильтра !

Рис. 3.44. Автоматический анализатор — нефелометр большой мощности Behring Nephelometer