Фотометрические методы исследования. Устройство и принцип работы спектрофотометра, страница 11

Количество фотодиодов определяет разрешающую способность спектрофотометрического прибора. Применение фотодиодной решетки является важным элементом проведения кинетических исследований, что позволяет одновременно производить замеры исследуемого субстрата и образующегося в ходе реакции продукта при различных длинах волн. Использование данной схемы обеспечивает высокое быстродействие при работе спектрофотометра в режиме сканирования: менее одной секунды на диапазон сканирования.

Важно подчеркнуть, что основные принципы действия спектрофотометра, отдельные оптико-механические схемы, блоки и узлы находят свое применение в различных специализированных приборах и автоматических анализаторах для клинических биохимических исследований.

Характеристики и примеры абсорбциометрических приборов

Основное назначение современных абсорбциометрических приборов — определение концентрации растворов с исследуемым веществом посредством сравнения величин поглощения или пропускания световой энергии исследуемого раствора и раствора известной концентрации.

Отличия между колориметрами, фотометрами и спектрофотометрами были показаны выше.

В настоящее время на рынке фотометрических приборов и в практических лабораториях можно встретить большое разнообразие различных по конструкции и характеристикам колориметров, фотометров и спектрофотометров.

Приборы могут отличаться:

—по форме представления информации (в единицах светопропускания, в единицах оптической плотности, в единицах концентрации или любых других значениях, по которым произведена калибровка);

— по способу построения и хранения калибровочных значений (автоматическое, ручное, длительное или краткосрочное);

— по способу подачи в прибор исследуемого раствора (проточная кювета, коммутируемая кювета, кюветы специальной конструкции, например, 96-луночный планшет и т.д.);

— по конструкции оптической системы (одноканальные и многоканальные);

— по виду источника излучения световой энергии (разнообразные лампы накаливания с телом накала из вольфрама, импульсные, газоразрядные лампы, светодиоды, лазеры).

Существуют и другие отличительные признаки, так или иначе влияющие на параметры и эксплуатационные характеристики приборов.

Основные параметры и характеристики колориметров.

1. Спектральный диапазон. Он характеризует спектральный диапазон длин волн, в которых работает прибор. Диапазон задается в нанометрах. В большинстве случаев фотометры (колориметры) работают в спектральном диапазоне 340—700 нм. Диапазон работы спектрофотометров, как правило, значительно шире (200— 950 нм). Так как фотометры, в отличие от спектрофотометров, формируют заданную длину волны дискретно с помощью полосовых фильтров, то каждому фотометру придается набор светофильтров.

Светофильтр аттестуется длиной волны, соответствующей максимуму пропускания, и полушириной полосы пропускания ДА..

Как отмечалось выше, применяются светофильтры, в основном, двух типов:

— светофильтры, изготовленные из цветного стекла (окрашенных жидкостей, окрашенной пластмассы или других селективно поглощающих материалов);

— интерференционные светофильтры, принцип действия которых основан на использовании явления интерференции в тонких многослойных пленках.

Ширина полосы пропускания светофильтров из цветного стекла значительно больше ширины полосы пропускания интерференционных светофильтров. В среднем, для стеклянных светофильтров ширина полосы пропускания ДА, лежит в пределах 20—50 нм, для интерференционных светофильтров 6—20 нм. Фотометрическое определение получается тем точнее, чем уже полоса пропускания фильтра Д^.

Если область максимального поглощения света фотометрируемым раствором достаточно широка и значительно больше полосы пропускания фильтра, то влияние изменения полосы пропускания на точность измерения сказывается меньше, чем для случая, характеризуемого узкой областью поглощения света раствором.

2. Динамический диапазон измерения. Энергия светового потока, прошедшая через раствор, измеряется с помощью фотоприемников, при этом сила тока, возникающего в фотоприемнике, прямо пропорциональна интенсивности светового потока, падающего на фотоприемник.