Контроль качества лабораторных исследований, страница 9

Подсчитывают отклонение каждого из результатов определений от средней арифметической Xi-X, (Xi-X)², после чего рассчитывают среднеквадратическое отклонение по известной формуле:

Затем находят величину средней ошибки (Sx), которая прямо пропорциональна среднему квадратическому отклонению и обратно пропорциональна числу проведенных исследований:

Разность средних результатов можно оценить по определению средней ошибки разности двух средних величин (Sx разн.)

где Sx₁ — средняя ошибка сравниваемого результата в одной лаборатории; Sx₂ — средняя ошибка сравниваемого результата в другой лаборатории.

Далее вычисляют распределение выборочных средних арифметических при малых выборочных совокупностях, подставив имеющиеся значения в критерий t-распределения по Стьюденту:

В заключительной фазе статистической обработки результатов исследований находят число степеней свободы (f) по формуле: f = n - 1, где п — число исследований.

На основании величины t и числа степеней свободы f пo таблице распределения Стьюдента определяют степень достоверности различий (р) (см. Приложение). Если р < 0,05, различие полученных результатов считается достоверным, что свидетельствует о неправильности полученных в лаборатории результатов. Отсюда, если р > 0,05, результаты являются правильными.

При осуществлении контроля на сопоставимость результатов лабораторного исследования необходимо помнить, что таковое следует выполнять в двух разных лабораториях с использованием одного и того же метода. В.Н. Снисаренко и О.C. Львовой (1986) было показано статистически достоверное различие результатов определения триацилглицеринов (р = 0,02), несмотря на удовлетворительные показатели коэффициента вариации (KB = 2-5%). Причинами этого явились недостатки в ходе выполнения методики. Так, выяснилось, что в одной из лабораторий производилось недостаточно интенсивное встряхивание содержимого пробирок в процессе экстракции и невыдерживание температурного режима при омылении триацилглицеринов, а в другой — использовались недостаточно надежные калибраторы. После внесения коррекций в указанные методики достоверность различий сопоставляемых результатов (р) возросла с 0,02 более чем до 0,05.

Для оценки правильности результатов обычно применяют контрольную сыворотку (с определенным содержанием исследуемого вещества, концентрация которого была неизвестна исполнителю в ходе выполнения им анализа). Для установления правильности используют также:

·  способ добавки (внесение в биологическую жидкость точно известной навески анализируемого вещества и последующее измерение его с помощью оцениваемого метода);

·  способ смешивания проб (при котором биологические жидкости с низкой и высокой концентрацией анализируемого вещества смешивают в различных соотношениях; этот способ допустимо применять и в методах определения активности ферментов);

·  сравнение с методом, правильность которого уже установлена (референтный метод).

Проверка надежности (правильности) методов радиоиммунного анализа, выполняемых с использованием соответствующих наборов реагентов, осуществляется обычно с помощью тестов на «открытие» и «параллелизм».

1. Тест на «открытие». К одинаковым аликвотам контрольной плазмы с известным содержанием определяемого в данной тест-системе вещества (например, 5 нг) добавляют стандартный раствор разных концентраций с содержанием, например, 100, 200, 400 и 800 нг в пробе и производят анализ. Определить процент «открытия», т.е. степень приближения к истинному содержанию вещества в пробе, можно, руководствуясь данными, приведенными в таблице 2.

Таблица 2. Определение процента «открытия»
Суммарное кол-во вещества в пробе, нг, Х	105 (5 + 100)	205 (5 + 200)	405 (5 + 400)	805 (5 + 800)
«Открытое» кол-во вещества в пробе, нг, У	98	201	408	816
Процент «открытия», (Y/X) х 100%	93.3	97,5	100,7	101.2