Аналитические основы клинической лабораторной диагностики, страница 6

Для ряда аналитов сложилась система промышленного приготовления рабочих калибраторов, состав которых сверяется с созданными международными (или национальными) организациями эталонами. Надежное выполнение лабораторных анализов предполагает, что свойства вещества "прослежены" от международного эталона до конкретного материала, по которому калибруется метод в данной лаборатории.

Калибровка обязательна при налаживании метода. Частота ее проведения в последующем зависит от конкретных обстоятельств. Она необходима при смене реактивов, а также если внутрилабораторный контроль качества исследований свидетельствует о наличии существенных погрешностей.

Следует иметь в виду, что результат калибровки может зависеть от качества калибровочного материала. Иногда промышленные фирмы предлагают калибровочные материалы пригодные только для одного метода, чаще всего для того, который служит основой набора реагентов, который комплектуется данным калибровочным материалом. Иногда эти материалы являются лишь имитаторами калибраторов, способными только в совершенно определенных условиях развивать окраску, похожую на ту, которая развивается при выполнении анализа. Изменение условий или использование таких "калибраторов" для других методов может быть источником грубых ошибок.

Принципы калибровки. Правила построения калибровочного графика.

Калибровка - это установление зависимости между непосредственными результатами измерения (например, окраской раствора или оптической плотностью) и концентрацией исследуемого вещества путем измерения нескольких (не менее двух) калибровочных растворов различной концентрации, что дает опорные точки, а промежуточные значения между ними вычисляются путем интерполяции.

В простейшем случае, когда работа выполняется вручную, строится калибровочный график. Для этого на одной оси откладывают концентрацию аналита, а на другой размер непосредственно полученных значений (например, оптической плотности). Соединив точки, отражающие реально выявленную зависимость между измеренными значениями и концентрацией аналита, получают линию, по которой далее ведут расчет. Задача значительно облегчается, если заранее известно, что линия должна быть прямой. Прямая линия (линейный калибровочный график) облегчает интерполяцию, т.е. определение концентраций, которые соответствуют значениями оптической плотности между калибровочными точками. Если точки не оказываются в точности на прямой линии, калибровочную линию проводят по линейке на глаз, так, чтобы линия была по возможности равно удалена (или одинаково близка) по отношению ко всем точкам. Этим достигается усреднение погрешности измерения.

Чтобы калибровочный график был прямой линией, т.е. калибровка была линейной, непосредственные результаты измерений предварительно математически обрабатывают. При фотометрии эта обработка сводится к замене количества прошедшего света величиной оптической плотности, которая пропорциональна концентрации вещества (закон Ламберта - Бера). Современные приборы обычно сразу выдают значение оптической плотности, автоматически проводя подобные вычисления. Иногда используются более сложные математические способы предварительной обработки данных, чтобы добиться линейности калибровочного графики. В настоящее время клиническая лабораторная аналитика располагает обширным арсеналом методов, которые при соблюдении условий выполнения анализа обеспечивают линейность калибровки (а значит и измерений содержания аналитов в биологических жидкостях) в широком диапазоне концентраций. Однако, в некоторых видах исследований, в частности, в турбидиметрических и иммуноферментных методах калибровка часто оказывается нелинейной, что осложняет расчет.