Кожу над пунктируемой веной тщательно обрабатывают 70% этиловым спиртом, затем 1-2% настойкой йода 30 с (от центра будущего прокола по направлению к периферии). Обработанному участку кожи дают высохнуть, затем производят венопункцию, после чего вновь обрабатывают участок 70% этиловым спиртом для удаления избытка йода, во избежание раздражения кожи.
2 этап. Учтите и оцените результаты посева крови обследуемого на среде Раппопорта (желчном бульоне).
Среда Раппопорта содержит желчный бульон, глюкозу или маннит, индикатор Андреде и поплавок. Она является для сальмонелл средой накопления, а также дифференциально-диагностической средой. При размножении брюшнотифозных бактерий в среде Раппопорта в результате расщепления глюкозы (маннита) до кислоты меняется цвет среды с желтого на красный, а в случае образования не только кислоты, но и газа, что характерно для паратифозных бактерий, последний накапливается в поплавке, вытесняя часть питательной среды. Из среды накопления при наличии признаков роста делают высевы на среду Эндо (Левина) и параллельно на среду Клиглера (МПА), так как в положительных случаях растет, как правило, чистая культура. В случае загрязнения среды накопления при нарушении правил взятия крови, среда Эндо позволяет выделить чистую культуру. Посевы инкубируют при 37° 18-24 ч.
3 этап. Оцените результаты посева накопительной культуры на среду Эндо (Левина), проведите первичную идентификацию выделенной гемокультуры с учетом морфо-тинкториальных, биохимических (на среде Клиглера) и антигенных свойств. Для изучения морфо-тинкториальных и антигенных свойств используйте гемокультру на скошенном МПА.
На среде Клиглера S. typhi ферментирует глюкозу (маннит) с образованием кислоты (пожелтение столбика агара), не расщепляет лактозу (окраска скошенной части агара не изменяется) и образует H2S (почернение среды). Паратифозные сальмонеллы ферментируют глюкозу (маннит) с образованием кислоты и газа, поэтому меняется не только цвет столбика, но и происходит его разрыв.
Сальмонеллы – это грамотрицательные полиморфные палочки, размером, расположенные, в основном, одиночно.
С чистой культурой грамотрицательных палочек, выросшей на обычном агаре, соответствующих по биохимии сальмонеллам, поставьте РА на стекле с адсорбированной поливалентной сальмонеллезной сывороткой групп А, В, С, Д, Е (см. занятие № 10). Положительный результат свидетельствует, что культура принадлежит к р. Salmonella. Для окончательной идентификации культуру сеют в среды “пестрого ряда” и ставят РА на стекле с соответствующими адсорбированными монорецепторными О- и Н-сыворотками (демонстрация).
4 этап. Учтите результаты «пестрого ряда». На основании всех полученных результатов определите видовую принадлежность выделенной гемокультуры; результаты занесите в протокол, заполните бланк-направление и бланк-ответ из бак. лаборатории.
II. Учтите и оцените результаты РА Видаля с сывороткой обследуемого с подозрением на брюшной тиф и брюшнотифозными, паратифозными А и В диагностикумами.
При серодиагностике брюшного тифа и паратифов А и В РА Видаля ставится одновременно с 4-мя диагностикумами: О- и Н-брюшнотифозными, А- и В-паратифозными. Это связано с тем, что клинически брюшной тиф, паратифы А и В практически не отличаются. Поэтому выявление специфических антител позволяет установить этиологию заболевания.
При интерпретации результатов РА Видаля необходимо помнить о том, что реакция может быть положительной не только у больных (инфекционный Видаль), но и при любом лихорадочном состоянии, если больной прежде болел брюшным тифом (анамнестический Видаль) и у привитых (прививочный Видаль). РА Видаля также может носить групповой характер, так как в сыворотке больного имеются антитела не только с специфическим, но и к групповым антигенам. Критерием дифференциации инфекционного Видаля является выявление нарастания титра специфических антител в 2 и более раза при исследовании парных сывороток.
Кроме того, дифференцированное определение О- и Н-антител позволяет установить период развития заболевания, так как О-антитела накапливаются в разгаре заболевания, а Н-антитела – в период реконвалесценции.
Критерием оценки результатов РА Видаля при однократно взятой сыворотке является диагностический титр, равный у невакцинированных взрослых 1:200, а у невакцинированных детей – 1:100 (см. занятие № 10).
III. Учтите и оцените результаты РНГА с эритроцитарным Vi-диагностикумом и сыворотками обследуемых из декретированной группы (работники пищевой промышленности).
РНГА с эритроцитарным Vi-диагностикумом используется чаще всего для выявления бактерионосительства S. typhi. Диагностический титр при оценке результатов равен 1:40(см. занятие № 10).
IV. Изучите и опишите в протоколе биопрепараты: адсорбированные агглютинирующие поливалентные групп А, В, С, Д, Е, монорецепторные О- и Н-сыворотки; брюшнотифозный бактериофаг; сальмонеллезный бактериофаг; сальмонеллезные диагностикумы, брюшнотифозная вакцина.
Вопросы для самоконтроля:
1. Обоснуйте выбор материала и методов микробиологической диагностики
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.
