Микробиологическая диагностика инфекций, вызываемых синегнойной палочкой (Pseudomonasaeruginosa)

Цель: На основе знаний биологии синегнойной палочки, особенностей ее взаимодействия с макроорганизмом уметь обосновать тактику микробиологической диагностики, профилактику и терапию, вызываемых ею заболеваний.

Знать:

1.  Классификацию и морфобиологические особенности синегнойной палочки.

2.  Особенности экологии, эпидемиологии, патогенеза и иммунитета при заболеваниях, вызываемыхP.aeruginosa.

3.  Роль P.aeruginosa в развитии внутрибольничных инфекций.

4.  Материал и методы микробиологической диагностики заболеваний, вызываемых P.aeruginosa.

5.  Профилактику и терапию заболеваний, вызываемых P.aeruginosa.

Уметь:

1.  Учесть и оценить результаты посева исследуемого материала по методу Gould.

Контрольные вопросы:

1.  Морфобиологические особенности P.aeruginosa.

2.  Факторы вирулентности P.aeruginosa и генетический контроль их образования.

3.  Особенности экологии P.aeruginosa и эпидемиологии вызываемых ею внутрибольничных инфекций.

4.  Материалы и методы микробиологической диагностики синегнойных инфекций.

5.  Профилактика синегнойных инфекций в ЛПУ.

6.  Особенности терапии синегнойных инфекций.

Задания, выполняемые в ходе занятия (УИРС):

I. Провести бактериологическое исследование раневого отделяемого от обследуемого с подозрением на синегнойную инфекцию:

1.1.  Изучить результат посева раневого отделяемого на кровяной агар (КА) и среду Эндо методом секторных посевов, отобрать и описать подозрительные колонии, подсчитать их количество на секторах и в 1 грамме исследуемого материала.

1.2.  Изучить культуры на среде Клиглера (демонстрация) и МПА, выделенные от обследуемого:

-  учесть биохимическую активность на среде Клиглера;

-  приготовить фиксированный препарат из культуры на МПА, окрасить по Граму, промикроскопировать.

1.3.  Учесть и оценить результаты определения способности культуры окислять глюкозу, образовывать оксидазу, расти при 42°, подвижности.

1.4.  Учесть и оценить антибиотикограмму исследуемой культуры.

На основании полученных результатов определить видовую принадлежность исследуемой культуры, оценить ее клиническую значимость, антибиотикограмму; заполнить бланк-направление и бланк-ответ из бак. лаборатории.

II. Биопрепараты: синегнойный бактериофаг, интести-бактериофаг, иммуноглобулин, гипериммунная плазма, инактивированная синегнойная вакцина.

Методические указания к выполнению исследовательского задания:

1.  Проведите бактериологическое исследование раневого отделяемого от  обследуемого с подозрением на синегнойную инфекцию, для чего:

1.1. Изучите результат посева раневого отделяемого от обследуемого на кровяной агар (КА) и среду Эндо, дайте характеристику выросшим колониям, подсчитайте их количество на секторах и в 1 г исследуемого раневого отделяемого.

На плотных питательных средах синегнойная палочка образует колонии средних размеров, сероватые, непрозрачные, часто отливающие металлическим блеском, плоские, с неровными краями; характерным является образование сине-зеленого пигмента и своеобразный запах «жасмина», «фиалки». На КА наблюдается хорошо выраженная гемолитическая активность.

Для определения количества микроорганизмов в 1 г (мл) исследуемого материала и оценки его клинической значимости посев раневого отделяемого осуществляется методом секторных посевов (метод Gould).

Исследуемый материал засевают стандартной бактериологической петлей на сектор I чашки с питательной средой 30-40 штрихами. После этого петлю прожигают и производят 4 штриха через сектор I в сектор II и аналогичным образом из сектора II - в сектор III и из сектора III – в сектор IV, каждый раз прожигая петлю (рис. 1).

Чашки инкубируют при 37°С 18-24 часа, после чего подсчитывают число колоний, выросших в разных секторах и по таблице №1 определяют количество микроорганизмов в 1 г исследуемого материала. Количество микроорганизмов, равное 10⁵ и выше клеток в 1 г (мл), свидетельствует об их клинической значимости.

1.2. Оцените биохимическую активность на среде Клиглера культур, выделенных на предыдущем этапе из колоний предполагаемого возбудителя, приготовьте фиксированный препарат из тех же культур на МПА, окрасьте по Граму и промикроскопируйте.

Синегнойная палочка при росте на среде Клиглера (Олькеницкого и др.) образует темный пигмент с перламутровым блеском; цвет среды не меняется, т. к. синегнойная палочка не ферментирует глюкозу, лактозу, не образует сероводород. P.aeruginosа - грамотрицательные, средних размеров (1,5-3,0 х 0,5-0,8 мкм) палочки, расположенные одиночно, парами, короткими цепочками, не имеют диагностически значимых включений, спор, подвижны. Оптимальные условия для роста: рН-7,2, t°-37°С; может расти