Расчет параметров оценки качества спермы быка, для искусственного осеменения

Знание концентрации сперматозоидов, или густоты спермы, необходимо для определения степени разбавления эякулята и его использования.

Существуют разные способы определения концентрации сперматозоидов. Чаще всего пользуются счетной камерой Горяева для подсчета клеток крови.

Определение концентрации сперматозоидов путем подсчета

Требуемые инструменты и реактивы:

1)  счетная камера Бюркера или Бюркера - Тюрка;

2)  шлифованное покровное стекло;

3)  эритроцитарный меланжер с резиновой трубкой;

4)  2%-ный раствор КОН или 3%-ный раствор NaCl,

Из свежего эякулята берут пробу около 1 мл и помещают временно в пробирку. Перед началом подсчета нужно приготовить счетную камеру. Покровное стекло кладут на предметное и слегка прижимают до появления ньютоновых колец. Чтобы покровное стекло крепко сидело, счетная камера и стекло должны быть сухими исовершенно обезжиренными.

В эритроцитарный меланжер набирают спермы точно до отметки 1,0 и добавляют раствора КОН или NaCl до отметки 101;таким образом, сперма  

разбавляется в 100 раз. Сперма и разбавитель перемешиваются в шарике пипетки при перевертывании ее при помощи находящейся в шарике красной бисеринки. После этого первые четыре капли из пипетки удаляют, так как они не содержат сперматозоидов, а пятую каплю помещают на середину площадки счетной камеры у самого края шлифованного покровного стекла. Капля под действием капиллярных сил проникает под покровное стекло в углубления счетной камеры. Нужно следить за тем, чтобы под покровным стеклом не образовывалось воздушных пузырей. После того как движение жидкости под покровным стеклом прекратилось, подсчитывают сперматозоиды в 80 лежащих по диагонали маленьких квадратах, которые сгруппированы по 16 в пяти диагонально расположенных больших квадратах. Концентрацию сперматозоидов получают из числа сперматозоидов, находящихся в 80 маленьких квадратах, с пересчетом на единицу объема 1 мкл по формуле:                      C = n * V   *    400 ,

Q*h*l 000 000

С - концентрация сперматозоидов;

n - число подсчитанных сперматозоидов;

V - фактор разбавления спермы;

Q - число квадратов,    в    которых    сосчитаны сперматозоиды;

h  - глубина счетной камеры (0,1 мм);

400 - число малых квадратов на площади 1 мм ;

1 000 000 - делитель для пересчета в млн/мкл.

После   подстановки   в   формулу   соответствующих   цифр   и   сокращения получаем количество спермиев в 1 мл эякулята.

В исследуемой сперме быка по всем вариантам задач концентрация низкая 0,68-0,84 млрд/мл.  С такой концентрацией для исскуственного осеменения ее нельзя использовать.

Показатель и методы определения процента живых (мёртвых) спермиев в эякуляте

Показатель процента живых (мёртвых) спермиев в эякуляте показывает, сколько живых (мёртвых) спермиев приходится на общее количество спермиев.

В.А.Морозов предложил использовать красители, которые окрашивают спермиев только мертвых и с колебательными движениями. Самый простой способ окраски спермы следующий. Исследуемая сперма должна иметь концентрацию спермиев 0,2-0,4 млрд/мл, при более высокой концентрации эякулят разбавляют 3%-ным раствором цитрата натрия до указанного показателя. Готовят 1-5%-ный раствор эозина водорастворимого на 3%-ном растворе лимоннокислого натрия. На чистое обезжиренное теплое (35 ± 2 °С) предметное стекло наносят каплю спермы, добавляют 2-3 капли краски, подогретой до 30 °С, смешивают 2-4 с и делают три тонких мазка, которые высушивают. В каждом препарате подсчитывают 100-150 спермиев, отдельно учитывая количество с окрашенными и неокрашенными головками.

Показатель процента мёртвых спермиев в эякуляте зависит от возраста, состояния организма, рациона кормов, моциона, эксплуатации самца и т.д.

Показатель процента мёртвых спермиев в эякуляте быка в среднем равен 7,5 баллов (66,4-96,4), исходя из данных, можно сказать, что сперма