Продукция интерлейкина-7 (IL-7) поддерживает рост пре-В и про-В-клеток, поддерживает пролиферацию Т-клеток, стимулирует пролиферацию, цитотоксическую активность Т-лимфоцитов и LAK-клеток.
Интерлейкин-8 (IL-8) обладает хемотаксической активностью для нейтрофилов, Т-клеток и базофилов, активирует нейтрофилы и индуцирует их адгезию с эндотелиальными клетками.
Интерлейкин-9 (IL-9) является синергистом эритропоэина в поддержке дифференцировки клеток эритроидного ряда.
Интерлейкин-10 (IL-10) является потенциальным супресором фенкций макрофагов, подавляет продукцию провоспалительных цитокиов активированными макофагами, усиливает пролиферацию В-клеток и продукцию имуноглобулинов.
Интерлейкин-11 (IL-11) является синергистом интерлейкина-3, усиливая все его дифференцировочные эффекты.
Интерлейкин-12 (IL-12) индуцирует дифференцировка некомитированных CD4 позитивных клеток в Т-хелперы 1 типа, стимулирует рост и дифференцировку наткральных киллеров и Т-лимфоцитов.
Интерлейкин-13 (IL-13) индуцирует рост и диффернцировку В-клеток и также ингибирует синтез провоспалительных цитокинов активированными макрофагами.
Интерлейкин-14 (IL-14) индуцирует пролиферацию и активацию В-клеток.
Интерлейкин-15 (IL-15) индуцирует пролиферацию активированных, но не покоящихся В-лимфоцитов, ингибирует секрецию иммуноглобулинов.
Интерлейкин-16 (IL-16) является хемооттрактантом для CD4 позитивных клеток и эозинофилов.
Интерлейкин-17 (IL-17) индуцирует продукцию Il-6,IL-8, G-CSF и PGE2, экспрессию ICAM-1 на фибробластах, эндотеоиальных и эпителиальных клетках.
Интерлейкин-18 (IL-18) индуцирует продукцию INF-γ и усиливает продукцию и усиливает продукцию GM-CSF.
Трансформирующий ростовой фактор-β (TGFβ) ингибирует рост различных типов клеток, стимулирует остеобласты и ингибирует остеокласты, стимулируе продукцию иммуноглобулинов А.
Фактор некроза опухолей β TNFβ подавляет рост опухолевых клеток, усиливает рост фибробластов, усиливает поверхностную экспрессию молекул гистосовместимости и клеточной адгезии.
В ходе иммунного ответа формирование макромолекулярного комплекса на поверхности контактирующих антигенпредставляющих клеток с прецитотоксическими CD8+T-лимфоцитами для HLA молекул I класса и с CD4+ хелперными Т-лимфоцитами для HLA молекул II класса приводит также к каскадным цитокиновым реакциям. Активированные в ходе презентации антигена макрофаги продуцируя IL-1 и IL-12 усиливает экспрессию HLA молекул на поверхности Т-лимфоцитов, что является дополнительным стимулом для активации этих клеток и формированием устойчивого антигенспецифического сигнала в иммунной системе. Баланс продукции IL-4 и IL-12 регулируя соотношение хелперов Th1/Th2 предопределяет путь формирования иммунного ответа, на последующих этапах которого вновь происходит продукция цитокинов (TNF, INF, IL-18) обладающих способностью усиливать экспрессию HLA молекул на поверхности уже эффекторных клеток, активируя их функции.
Из представленных данных следует, что продукция цитокинов и процессы биогенеза молекул гистососвместимости, в частности величина экспрессии HLA-молекул на поверхностной мембране клеток иммунной системы, являются компонентами единого процесса функционирования иммунной системы и реализации ее основных функций.
Методы исследования в иммуногенетике
Иммуногенетические исследования проводятся в настоящее время в медицинских учреждениях для подбора органов и тканей для аллогенных трансплантаций; в медицинских учреждениях, где решаются проблемы раннего диагноза и прогноза заболеваний, развитие которых ассоциировано с HLA-антигенами; в центрах планирования семьи для установления причин бесплодных браков; в судебно-медицинских центрах для установления отцовства; в лабораториях антропологии и этнографии при анализе путей миграции и происхождения народов; в научных лабораториях клинической иммуногенетики при изучении механизмов генетики иммунного ответа и т.п.
В 60-е годы была разработана методика серологического типирования HLA-антигенов, использующая принцип микролимфо-цитотоксического теста, заключающегося в избирательном взаимодействии HLA-молекул на поверхностной мембране лимфоцитов обследуемого пациента со специфическими анти-HLA-антителами и комплементом, приводящим к гибели клеток, что определяется при световом микроскопировании клеток с витальными красителями. Существуют и автоматизированные варианты учета таких реакций с использованием двух- и трехцветной цитофлуориметрии в планшетном и проточном вариантах с использованием специальных приборов.
Для проведения таких исследований по методике американского ученого П.Терасаки, необходимы одноразовые пластиковые микрокамеры, микрошприцы, дозаторы; а также жизнеспособные мононуклеарные клетки периферической крови пациента и выделенные из них В-лимфоциты; специфические к отдельным HLA-антигенам антитела в виде моноспецифических аллоантисывороток или моноклональных антител; активный пуллированный кроличий комплемент, специальные витальные красители и оборудование для визуализации результатов в виде микроскопа или специальных приборов.
Выделение клеток периферической крови (по Boyum A., 1968): мононуклеарные клетки пациента выделяют из гепаринизированной крови (100 ЕД гепарина на 10мл крови). 5мл гепаринизированной крови смешивают с равным объемом среды Хенкса (или другой питательной средой: среда 1999, RPMI) и наслаивают пастеровской пипеткой на градиент плотности верографин/фикола (плотность смеси 1,076- 1,077), налитого в центрифужную пробирку в объеме 2,5мл. Центрифугируют 40 мин. При 1500 об/мин; осторожно отсасывают «белое облачко» лимфоцитов, образовавшихся в интерфазе, и переносят его в мерную центрифужную пробирку. Дважды отмывают в двойном объеме питательной среды в режиме: 10 мин. при 1500 об/мин и второй раз – 10 мин. при 1000 об/мин. Надосадочную жидкость удаляют, а осадок ресуспензируют в растворе Хенкса, доводя концентрацию лимфоцитовдо 2,5-3,0 млн. в 1мл. Постановка реакции: типирующие сыворотки раскапывают в лунки планшетов Терасаки под вазелиновое масло и замораживают (-70°С) до момента использования. Лимфоцитарную взвесь раскапывают микрошприцем Терасаки в планшеты по 1 мкл в лунку и инкубируют при 26°С 40 мин. вместе с типирующими сыворотками. В каждую лунку добавляют 5 мкл свежезамороженного кроличьего комплемента и инкубируют при комнатной температуре час. Резко стряхивают планшеты для удаления вазелинового масла и закапывают в каждую лунку 1мкл трипанового синего или эозина; через 10мин избыток краски удаляют стряхиванием и учитывают реакцию; клетки «убитые» цитотоксическими антителами, окрашены в голубой или красный цвет. Интенсивность цитотоксической реакции оценивают по следующей шкале:
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.