Фотометрические методы исследования. Устройство и принцип работы спектрофотометра, страница 15

Данный вид исследования мутных сред основан на измерении изменения интенсивности потока световой энергии, прошедшего через дисперсную систему. Изменение потока световой энергии вызвано как поглощением, так и его рассеянием дисперсной системой. Метод аналогичен колориметрическому методу, но в ряде случаев измерение может происходить в потоке «белого света» без применения полосовых фильтров.

С точки зрения чувствительности метода, в частности при определении концентрации имму-ноглобулинов, сравнение нефелометрии и турби-диметрии оказывается в пользу нефелометрии, т.к. этот метод более чувствителен, когда небольшое количество взвешенных частиц приводит к заметному возрастанию сигнала при незначительном фоне.

Повышение чувствительности нефелометрических исследований и их распространение в иммунологии с использованием современных автоматизированных нефелометров явилось следствием ряда причин. Частично это обусловлено введением полимеров в смесь с образцом. Частично — эффективным выделением фонового рассеяния, непосредственно вызванного комплексами антиген—антитело.

Рис. 3.36. Фотометр Technicon RA-50 фирмы Вауег, Германия

Рис. 3.37. Фотометр 5010 фирмы Roche-Boeh ringer

Рис. 3.38. Фотометр CORMAY MLJLTI, Польша

Рис. 3.39. Микропланшетный фотометр Stat Fax 2100 фирмы AWERENES TECHNOLOGY INC., США

Рис. 3.40. Спектрофотометры LS 500 фирмы Dr. Lange (Германия) для клинико-лабораторных (рутинных) исследований

Большинство современных приборов может определять и отслеживать «избыток» антигенов автоматически. Влияние фонового рассеяния уменьшено в ряде приборов отказом от измерения рассеяния под углом 90° и электронным вычитанием фоновых сигналов (скоростная нефелометрия).

С другой стороны, принято считать, что если уровень регистрируемого рассеяния не превышает 20% от световой энергии, поступающей в дисперсную среду, то результаты турбидиметри-ческих измерений могут оказаться недостоверными.

Преимущество турбидиметрического анализа заключается в том, что измерения могут быть выполнены практически на любом колориметре или фотометре. Повышение чувствительности турбидиметрических исследований может быть достигнуто за счет использования спектрофотометров с высококачественными детекторами.

Направления прохождения потоков световой энергии, поясняющие принципы проведения турбидиметрических исследований, показаны на рис. 3.43.

Основные компоненты, которые используются при построении нефелометрических и турбидиметрических приборов, похожи и включают источник света, фильтр и фокусирующую световой поток систему линз, кювету с образцом и детектор с устройствами отображения и регистрации результата. В качестве источника света обычно используются ртутные дуговые, лампы, вольфра мо-йодистые лампы и гелий-неоновые лазеры. Лазеры излучают монохроматический свет, сконцентрированный в узкий и интенсивный луч. Однако лазеры очень дороги и могут излучать ограниченный набор фиксированых по частоте волн.

О возможностях и характеристиках современных нефелометров и турбидиметров можно судить по фирменной информации о представленных ниже моделях.

Примеры нефелометров и турбидиметров

Нефелометр Behring Nephelometer 100

концерна DADE — Behring (США, Германия) (рис. 3.44) Высокопроизводительный автоматизированный нефелометр для определения специфических белков в сыворотке, моче и спинномозговой жидкости.

Основные технические характеристики. Источник света мощный фотодиод с ИК-излучением Рабочая длина волны 840 нм
Измерительные кюветы	многоразовые тест-
	кюветы
Размещение кювет	карусель на 45 кювет
Размещение образцов	карусель на
	75 позиций
Размещение реагентов	карусель на
	40 флаконов
Диапазоны разведения
образца	1 : 1—1:20000
Производительность	105 тестов в час
Режимы работы	пакетный,
	произвольного
	доступа и экстренно
	го анализа
Реактивы	открытая система,
	большая номенклату
	ра готовых реагентов
	изготовителя
Компьютерное обеспе
чение	Apple Macintosh