Оптические методы количественного анализа

шкала оптических плотностей обозначена красным цветом, а шкала пропускания — черным.

Если оптическая плотность раствора соответствует 1, то через его слой проходит 10% интенсивности падающего светового потока (остальные 90% поглощаются). Для большинства современных автоматизированных приборов это крайне большая величина, превышение которой не гарантирует получения надежных результатов измерения. Во всех выпускавшихся ранее фотометрах наибольшая точность измерения достигается при значениях абсорбции около 0,3 (в этом случае через раствор проходит половина падающего на него светового потока); по мере ее снижения точность измерения, а следовательно, и достоверность полученных результатов уменьшаются.

Полученное значение абсорбции (оптической плотности) есть произведение величины концентрации на толщину слоя раствора. Практически одинаковые показатели экстинкции получают при фотометрии исходного раствора в кювете с длиной оптического пути 1 см и того же раствора, предварительно разведенного в 2 раза, но в кювете с длиной оптического пути 2 см. К повышению чувствительности измерения приводит удлинение оптического пути за счет сокращения поперечного сечения кюветы (при этом объем раствора остается прежним). Однако возможности этого приема фотометрии ограничены: чем уже и длиннее кювета, тем более высокие требования предъявляются к фокусировке и юстировке луча света. Поэтому большинство клинико-биохимических исследований рассчитано на проведение измерений в кювете с длиной оптического пути 1 см; значительно реже используется кювета с длиной оптического пути 0,5 см, еще ре-

 же — кюветы с длиной оптического пути 2 см. Следует стремиться к тому, чтобы фотометрия осуществлялась в кюветах с толщиной слоя 1 см: доказано, что этот режим фотометрии самый  выигрышный.  Повышение чувствительности фотометрического исследования обычно достигается  путем  использования  особых  по  конструкции (узких   и   длинных)   кювет,   позволяющих   значительно уменьшить  объем  фотометрируемого  раствора.   Однако нужно иметь в виду, что при уменьшении объема раствора до величины меньше 0,5 мл точность фотометрического измерения снижается и возрастает вероятность появления ошибки. В большинстве современных биохимических анализаторах используются кюветы с длиной оптического пути 1 см при объеме внесенной в них жидкости 0,5—1,0 мл.

Благодаря использованию проточных кювет точность фотометрии значительно возрастает, поскольку отпадает необходимость каждый раз вынимать кювету для заполнения ее новой порцией исследуемого раствора, что сделало процедуру измерения также и более быстрой и удобной (спектрофотометр «СОЛАР» РУ 1251 С, «Кормей Плюс»),

Фотометрические приборы представлены обычными фильтровыми фотометрами и спектрофотометрами, в которых отдельные участки спектра выделяют при помощи призм или диффракционных решеток; это позволяет установить любую длину волны