Сложные методы окраски для выявления ультраструктурных компонентов бактериальных клеток

Сложные методы окраски.

Ø  Сложные методы окраски используются для выявления ультраструктурных компонентов бактериальных клеток.

Окраска по методу Грама.

1. 

Гр+        темно-фиолет Гр-         красный (в основе метода – избирательное обесцвечивание под действием спирта)

На фиксированный мазок –через фильтровальную бумагу –   карболо-спиртовой раствор генцианового фиолотового  1-2 мин.

2.  Раствор Люголя 1-2 мин.

3.  Этиловый спирт (обесцветить) 30-60 сек.

4.  Промыть Н₂0

5.  Докрасить водным раствором Фуксина 1-2 мин.

6.  Промыть, высушить, микроскопировать.

Окраска по методу Циля-Нельсена (кислотоустойчивых бактерий)

1. 

Кислотоустойчивые – красн. В основе метода – разрыхление клеточной стенки

На фиксированный мазок –через фильтровальную бумагу – карболовый раствор фуксина , греть 3-5 мин до появления паров.

2.    Снять бумагу, промыть Н₂0

3.  5% р-р Н₂SO₄     или 3% р-р спирта+хлористовидородн. к-ты. 1-2 мин.

4.  Промыть Н₂0

5.  Докрасить водным раствором метилинового-синего 3-5 мин.

6.  Промыть, высушить, микроскопировать.

Окраска спор по методу Ожешко

1. 

Споры-Синие;Вегет.Ф.-Красные.

На НЕфиксированный мазок 0,5% р-р хлористовидородной кислоты 2-3 мин. На пламени.

2.  Кислоту смыть, промыть Н₂0, зафиксировать над пламенем.

3.  Окрасить по методу Циля-Нельсена.

Окраска спор по методу Шеффера-Фултона

1. 

Споры-зелен;Вегет.Ф.-Красные.

На фиксированный мазок 5% р-р малахитового-зеленого и  3-4 раза нагреть – до паров.

2.  Промыть Н₂0.

3.  Докрасить 0,5% сафранином – 30 сек.

4.  Промыть, высушить, микроскопировать.

Зерна волютина – включения полифисфатов - темно-синие.

Окраска спор по методу Нейссера

1.  На фиксированный мазок ацетат синьки Нейссера 2-3мин.

2.  Добавить р-р Люголя на 10-30сек.

3.  Промыть Н₂0.

4.  Докрасить водным раствором Везувина или хризоидина 0,5-1мин.

5.  Промыть, высушить, микроскопировать.

Окраска микрокапсул по методу Бурри-Гинса

1.  Смешать каплю взвеси микробных клеток с каплей туши и при помощи стекла со шлифиваным краем сделать мазок таким образом, как мазок крови.

2. 

Бактериии –  Красный Фон-              Черно-розовый

Высушить, Фиксировать.

3.  На мазок нанеси видный раствор Фуксина 1-2 мин.

4.  Промыть, высушить, микроскопировать.