Заполнив камеру, поместить ее под микроскоп и, если форменные элементы расположены равномерно (что является показателем хорошего перемешивания крови), приступить к подсчету. Считать эритроциты удобнее при большом увеличении.
Необходимо подсчитать число эритроцитов в 5 больших квадратах, расположенных в разных местах сетки, например, по диагонали. Во избежание двухкратного подсчета клеток, лежащих на границе между малыми квадратиками, руководствоваться правилом Егорова, согласно которому, относящимися к данному квадратику считаются эритроциты, лежащие как внутри квадратика, так и на его левой и верхней границе. Эритроциты, лежащие на правой и нижней границе для данного квадратика не учитываются.
Формула для вычисления количества эритроцитов в 1 мм3 крови:
А х 4000 х 200
N = ————————, где:
80
N - искомое число эритроцитов;
А - число эритроцитов в 80 маленьких квадратиках (или в 5 больших);
4000 - множитель для получения содержания эритроцитов в одном мм3 крови;
200 - степень разведения эритроцитов.
Для перевода полученного количества эритроцитов в единицы СИ, подсчитанное количество эритроцитов умножить на 106 и выразить в N х 1012 /л (тера на литр). Зарисовать фрагмент сетки камеры Горяева с маленькими и большими квадратами.
В выводе сравнить количество подсчитанных эритроцитов с нормой.
5) ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЦВЕТОВОГО ПОКАЗАТЕЛЯ КРОВИ
Цветовой показатель (ЦП) отражает насыщенность эритроцитов гемоглобином.
Ц е л ь р а б о т ы: освоить методику и рассчитать ЦП крови.
Д л я р а б о т ы н е о б х о д и м ы: данные количества эритроцитов и содержания гемоглобина в крови.
Х о д р а б о т ы
У испытуемого определяют количество эритроцитов и гемоглобина в крови. Расчет цветового показателя производят по формуле:
Hb г/л х 3
ЦП = —————— где:
А
А - число эритроцитов в 1 мкл (первые три цифры).
ЦП можно определить по номограмме. Сравнить его с нормой.
6) ПОДСЧЕТ КОЛИЧЕСТВА ЛЕЙКОЦИТОВ
Лейкоциты представляют собой клеточные элементы, непосредственно участвующие в иммунозащитных реакциях. Они в отличие от эритроцитов содержат ядра и обладают способностью выходить из кровеносного русла и самостоятельно передвигаться.
Ц е л ь р а б о т ы: освоить методику и определить количество лейкоцитов в исследуемой крови.
Д л я р а б о т ы н е о б х о д и м ы: микроскоп, счетная камера Горяева, меланжер для подсчета лейкоцитов , 5 % раствор уксусной кислоты с метиленовой синью, покровные стекла, регулируемая пипетка, пробирки, вата, спирт, йод, эфир, стерильный скарификатор. Объект исследования - человек.
Х о д р а б о т ы
Камеру Горяева предварительно подготовить путем притирания покровного стеклышка к боковым выступающим граням камеры до появления цветных (ньютоновских) колец. В каплю свежей крови погрузить кончик меланжера (смесителя) для лейкоцитов с белой бусинкой в расширении (см. рис.1) и набрать кровь до метки 0,5 без пузырьков и быстро, пока кровь не свернулась, перенести кончик меланжера в раствор уксусной кислоты, подкрашенной метиленовой синью. Раствор уксусной кислоты набрать до метки 11, при этом кровь разводится в 20 раз. После этого взять заполненный меланжер, зажать его концы 1 и 3 пальцами, и в течении 1 мин его встряхивать. После тщательного перемешивания крови, удалив предварительно 1-2 капли, нанести небольшую капельку на сетку камеры.Если капля слишком велика, то жидкость может попасть на боковые грани камеры и высота слоя над сеткой будет больше 0,1 мм, дальнейшие расчеты будут ошибочны. В этом случае камеру следует промыть дистиллированной водой, насухо вытереть и заполнить снова. Разведенную в меланжере кровь следует еще раз перемешать.
При необходимости разведение такой степени может быть выполнено другим способом, например, смешиванием 0,1 мл крови с 2,0 мл 5 % уксусной кислоты в пробирке. Содержимое пробирки в этом случае следует тщательно перемешать.
Заполнив камеру, поместить ее под микроскоп и приступить к подсчету. Лейкоциты удобнее считать при малом увеличении. Подсчет производить в 25 больших квадратах, что составляет 400 маленьких квадратиков. При подсчете пользоваться правилом Егорова:
лейкоциты, лежащие на правой и нижней границах (линиях) данного квадрата не учитываются.
Формула для вычисления количества лейкоцитов в 1 мм3 крови:
В х 4000 х 20
N = —————— где:
400
N - искомое число лейкоцитов;
В - число лейкоцитов в 25 больших (400 малых) квадратах;
4000 - множитель для получения содержания лейкоцитов в 1 мкл крови;
400 - число маленьких квадратиков в 25 больших квадратах;
20 - степень разведения крови.
Для перевода количества лейкоцитов в единицы СИ, полученную величину умножить на 106 и выразить в N х 109 (гига на литр).
Сравнить найденное количество лейкоцитов в крови испытуемого с нормой.
7) ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ
Групповая принадлежность крови определяется содержанием агглютиногенов (А и В) в эритроцитах и агглютининов (a и b) в плазме крови.
Ц е л ь р а б о т ы: освоить методику определения группы крови и определить групповую принадлежность крови испытуемого.
Д л я р а б о т ы н е о б х о д и м ы: предметное стекло, стеклянные палочки, стандартные сыворотки I, II, III групп, вата, спирт, йод, эфир, стерильный скарификатор. Объект исследования - человек.
Х о д р а б о т ы
Предметное стекло поместить на белую бумагу и нанести (не смешивая) по капле стандартной сыворотки I, II и III групп. Рядом с каплями стандартных сывороток поместить на предметное стекло небольшие капельки полученной из пальца крови (примерно 1/3 от капли сыворотки). Тщательно размешать, соединив чистой сухой щтдельной стеклянной палочкой капли крови и сыворотки, пока смесь не примет равномерного розового цвета.
Реакция агглютинации наступит через 1-5 мин. При наличии агглютинации капля становится прозрачной, а эритроциты склеиваются в виде комочков.
1. Отсутствие агглютинации в каждой из трех смешанных капель совороток позволяет отнести исследуемую кровь к 0(I) группе.
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.