Тетрадь для лабораторных работ по спецкурсу "Экспериментальная иммунология", страница 2

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА 1.

дата

Практические навыки работы с лабораторными животными. Условия содержания, маркировка. Формирование опытных и контрольных групп животных. Индукция иммунного ответа в эксперименте. Иммунизация. Схемы проведения. Мониторинг развития иммунного ответа

Методический материал

Как правило экспериментальные исследования в области биологии и медицины, включая иммунологию, проводятся с использованием лабораторных животных. При проведении экспериментов особое внимание уделяется адекватному и гуманному содержанию лабораторных животных. Для содержания животных предназначено специальное помещение - виварий. Условия содержания животных  в виварии в нашей стране регламентированы "Ветеринарно-санитарными правилами содержания лабораторных животных в вивариях научно-исследовательских институтов, станций, лабораторий, учебных заведений, а также в питомниках",  "Санитарными правилами по устройству, оборудованию, содержанию экспериментально-биологических клиник (вивариев)", Ветеринарным законодательством и др. документами.

     Виварий должен состоять из:  1) помещения для приема животных; 2) карантинного отделения; 3) комнат для содержания животных; 4) манипуляционной;  5) операционной;  6) ветеринарно-диагностического кабинета и др. вспомогательных служб.  В виварии обеспечивают изоляцию поступивших  и  находящихся  в  карантине и в изоляторе животных, изоляцию "чистых" и "грязных" потоков, естественное и искусственное освещение,  отопление,  непрерывную вентиляцию, снабжение холодной и горячей водой, канализацией. Мышей, морских свинок, кроликов,  крыс,  хомяков,  кур размещают в находящихся на стеллажах клетках,  строго соблюдая плотность посадки;  собак и обезьян - в отдельных кабинах,  кошек - в вольерах. Дно клеток покрывают тонким слоем опилок или стружек,  предварительно  простерилизованных при 150 -180 °C в течение 15 -20 мин.  В поилках клеток должна быть питьевая вода,  отвечающая требованиям ГОСТа "Вода питьевая". Необходимо соблюдать нормы и режим кормления. Посуду от воды и кормов следует регулярно дезинфицировать, мыть и ополаскивать.

     После карантина (мыши,  крысы - 10 сут, собаки - 30, остальные животные - 21 сут) животных маркируют (мышей и птиц - окраской,  кроликов - надеванием на ухо бирки с номером, птиц - кольцеванием), осматривают, взвешивают, замеряют температуру, частоту дыхания,  пульс. Если отклонения от нормы отсутствуют, животное берут в опыт и переводят в  специальное  помещение.  Вышедших  из опыта  животных  подвергают  безболезненному умерщвлению (эвтаназии). Мелких животных умерщвляют декапитацией или ингаляцией хлороформа (эфира),  кроликов - воздушной эмболией, крупных животных -- электрическим током.

Все эксперименты выполняются в определенном порядке:

1) проводят выбор вида животных, оптимальный для целей и задач конкретного исследования,

2) формируют опытную и контрольную группу, проводят маркировку животных. Мышей маркируют окраской  пикриновой кислотой или спиртовым  раствором  фуксина,   надрезом края уха, обрезанием коготков; более крупных  животных - нумерованными бляшками или кольцами.  Морских свинок можно маркировать зарисовкой окраски,  которая у них редко повторяется,

3) выбирают метод инвазивной манипуляции с последующим ее проведением. В случае иммунологического эксперимента речь идет об иммунизации с целью индукции иммунного ответа для изучения его динамики или для реализации других задач, а также о получении различных иммунокомпетентных клеток. При проведении манипуляции животное фиксируют. Мышь фиксируют левой рукой за кожную складку затылка  (или шеи) и за хвост (иногда за хвост и заднюю лапку);  крыса - корнцангом; морская свинка и кролик  - путем пеленания в  полотенце или  помещение  в  специальный станок. При болезненных манипуляциях проводят предварительное обезболивание:  мелких животных помещают до засыпания в закрытый стеклянный сосуд, в котором находится вата,  смоченная эфиром или хлороформом; кроликов  усыпляют с помощью специальной маски или надетого на нос бумажного конуса, в узком конце которого находится смоченная эфиром или хлороформом вата.

Иммунизация проводится различными способами - антиген вводится внутривенно, внутрибрюшинно, подкожно. Для внутривенной иммунизации после фиксации животного в специальном домике, находят хвостовую вену. Для облегчения этой процедуры иногда необходимо согреть хвост путем опускания его в сосуд с горячей водой. Хвост обрабатывают спиртом. После испарения остатков спирта вводят тонкую иглу (внутрикожную) в вену хвоста и вводят антиген. Для внутрибрюшинной иммунизации фиксируют мышь, разворачивая ее брюшком вверх, обрабатывают поверхность антисептиком (спиртом) и вводят иглу параллельно брюшной стенке, чтобы не повредить внутренние органы. Прокол иглой брюшины ощущается как незначительное препятствие. Аналогично проводят подкожную иммунизацию, место введения антигена, как правило в области задних лапок.

4) наблюдение за животным, мониторинг развития изучаемого процесса - зависит от ожидаемого эффекта. В течение всего периода наблюдения ведется дневник наблюдений, в котором фиксируются все изменения в состоянии животных опытной и контрольной групп. В случае гибели животного,  проводят его досрочное вскрытие и изучение внутренних органов, при необходимости дополняемое патоморфологическим, микробиологических и др. методами исследования,

5) снятие животных с эксперимента, проведение различных реакций для регистрации результатов исследования

Задания

Протокол

1. Освоить правила обращения с лабораторными животными, научиться фиксировать животное и маркировать его.

2. Взвешивание животного

3. Подготовка антигена для иммунизации. Расчет дозы антигена: для иммунизации вводят каждой мыши массой 20 г  5´10⁶ эритроцитов или 25 мкг/кг овальбумина (исходный раствор овальбумина в концентрации 1 мг/мл).

4. Обработка участка кожи животного антисептиком

5. Введение антигена (иммунизация)

6. Дневник наблюдения (дни эксперимента)                                                                  1  

2

3

4

5