Системные микозы. Основные методы лабораторной диагностики кандидозов и аспергиллезов: Методическая разработка для проведения практических занятий по клинической микробиологии, страница 8

Перед началом лабораторных исследований некоторые биосубстраты предварительно обрабатывают, так смыв, лаваж, ликвор, мочу и др. центрифугируют 5 мин при 1500 об/мин, надосадочную жидкость сливают, а осадок подвергают лабораторному микологическому анализу. Мокроту гомогенизируют в стерильном физиологическом растворе, кал разводят физ.раствором в соотношении 1:10. Кровь, гной, соскобы с кожи и ногтей и т.п. предварительно не обрабатывают.

При микроскопии нативных препаратов различных биосубстратов обнаружение фрагментов плесневого мицелия, цепочек конидий, ко-нидиеносцев свидетельствует о возможном инфицировании грибами. Дальнейшая микроскопия мазков, окрашенных по Граму, позволяет выявить сопутствующую микрофлору, ответную воспалительную реакцию организма, грамположительные морфологические элементы плесневого гриба.

Посев патологического материала проводят в двух повторениях для инкубации в различных температурных режимах - при 26°С и 37°С по всей поверхности агара и в трех точках в центре чашки. При поражениях кожи, ногтей, среднего уха и конъюктивы материал инкубируют при 26°С. Одновременно с посевом осуществляют контрольный забор воздуха лаборатории на плесневую микофлору.

После 4-5 дней инкубации на среде можно видеть рост плесневых колоний белого, желтого, различных оттенков зеленого и черного цвета. Предварительную оценку этиологической значимости выросшей культуры осуществляют по характеру роста, наличию схожих колоний в обоих повторах и по отсутствию роста идентичных штаммов в контрольной чашке Петри.

Микроскопически колонии Aspergillus представлены типичными ко-нидиеносцами с шаровидными вздутиями на концах, на которых образуются один или два ряда фиалид с цепочками спор. Для видового определения выделенные возбудители пересевают на агар Чапека-Докса, инкубируют при 26°-30° в течение 7 дней и затем идентифицируют по культуральным особенностям роста колонии на среде (структура, поверхность, цвет, окрашивание субстрата) и микроморфологии гриба. При изучении гистологических срезов диагноз аспергиллеза ставят на основании обнаружения в тканях плесневого мицелия с характерным дихотомическим ветвлением.

Агар Чапека-Докса

NaNO3                                3 г

tyiPO,                                  1 г

MgSO4 x 7 Н2О                 0,5 г

КС1                                     0,5 г

FeSO4x7H2O                      0,01 г

Глюкоза                              30 г

Агар                                    15 г

Дистиллированная вода        1 л Автоклавировать при 110-120°С 15 мин

 Характеристика наиболее распространенных видов. A.Jumigatus. Колонии пушистые или бархатистые голубовато-зеленого цвета, обратная сторона колоний бесцветная или желтая. Конидие-носцы гладкие, неокрашенные, вздутие бутылевидное. На верхней части вздутия конидиеносца расположен один ряд фиалид. Цепочки конидий образуют плотную колонку. Конидии шаровидные, шиповатые, темно-зеленые.

A. niger. Колонии черного цвета, обратная сторона колоний неокрашенная или светло-желтая. Конидиеносцы гладкие, толстостенные, в верхней части слегка коричневые, вздутие шиаровидное. На поверхности вздутия конидиеносца образуется два ряда фиалид (профиалиды и фиа-лиды). От фиалид радиально отходят цепочки шаровидных коричневых конидий с гладкой или бородавчатой поверхностью.

A. flavus. Колонии клочковатые, зеленовато-желтого цвета, обратная сторона колоний желтоватая. Конидиеносцы неокрашенные или желтые, шероховатые, вздутие бутылевидное или почти шаровидное. На поверхности вздутия расположен один ряд фиалид. От фиалид радиально отходят цепочки конидий. Конидии грушевидные или шаровидные, шиповатые, желто-зеленые.

A.terreus. Колонии бархатистые, иногда пушистые, коричнево-желтые, обратная сторона колоний тускло-желтая до коричневой. Конидиеносцы гладкие, бесцветные, вздутие полушаровидное, куполовидное. На поверхности вздутия конидиеносца образуется два ряда фиалид. Цепочки конидий образуют плотную колонку коричневого цвета. Конидии шаровидные, гладкие.