Наиболее оптимальным и быстрым методом выделения грибов из крови является метод лизис-центрифугирования, который заключается в смешивании 10 мл крови с химическими компонентами, лизирующими клетки крови и инактивирующими бактериальную флору. Смесь центрифугируют и осадок засевают на агар Сабуро.
Посевы выращивают в течение 10 дней при температуре 25-30°С и 37°С.
Цереброспинальная жидкость (ликвор)
Осадок ликвора засевают на 2 чашки с агаром Сабуро по 0,1 мл, а остаток спинномозговой жидкости - в пробирки с жидкой средой Сабуро.
Чашки инкубируют при 25-30°С и 37°С, жидкую среду - при 25-30°С.
Срок инкубации - 10 дней.
Посевы начинают просматривать со второго дня. Если на 5 день рост не отмечается, производят высев из жидкой питательной среды на чашки с агаром Сабуро. Повторный посев также инкубируют при двух температурах.
Мокрота, промывные воды бронхов, гайморовых полостей
Материал после предварительной обработки засевают в количестве 0,1 мл на агар Сабуро и инкубируют при 25-30 °С и 37°С в течение 7 дней.
Моча и другие жидкости тела
Мочу, сок простаты, желчь, дуоденальный сок, абдоминальную и синовиальную жидкости и др. после центрифугирования засевают в количестве 0,1 мл на агар Сабуро и инкубируют при 25-30°С и 37°С в течение 7 дней.
Гной
Материал засевают на агар Сабуро и инкубируют при 25-30°С и 37°С в течение 7-10 дней, в случаях мицетомы - до 4 недель.
Ткани
Небольшие фрагменты ткани растирают шпателем по поверхности агара Сабуро. Одновременно кусочки тканей помещают в жидкую среду Сабуро. Посевы инкубируют при 25-30°С и 37°С в течение 10-14 дней.
Фекалии
Фекалии разводят 1:10 (1 г фекалий и 9 мл физиологического раствора или стерильной воды), размешивают, отстаивают 10 мин для осаждения крупных частиц, затем надосадочную жидкость в количестве 0,1 мл засевают на агар Сабуро. Посев инкубируют при 37°С в течение 7 дней.
Засеянные чашки начинают просматривать на второй день после посева. Особенно это важно при исследовании биосубстратов на наличие мицелиальных грибов. При обнаружении плесневых колоний отмечают рост культуры в точке посева и отсутствие роста идентичных штаммов в контрольной чашке забора воздуха на стерильность.
При проведении количественных исследований биосубстраты (мокрота, промывные воды бронхов, гайморовых полостей, моча, кал и др.) засевают на агар мерно в количестве 0,1 мл. Количественный учет выросших колоний проводят в колоний-образующих единицах на 1 мл исследуемого биосубстрата (КОЕ/мл) по формуле n=abc, где а - среднее число колоний, Ь=10 при объеме посевного материала 0,1 мл, с - степень разведения материала (10,100, 1000).
При исследовании крови, ликвора, отделяемого невскрывшихся абсцессов, биоптатов и др. количественный учет грибов не проводят, т.к. диагностическое значение имеет наличие роста возбудителя. Обнаружение грибов в соскобах с кожи, ногтевых валиков и ногтевых пластинок свидетельствует о заболевании только при наличии характерных клинических проявлений.
Идентификация возбудителей системных микозов Дрожжеподобные возбудители
Характерной чертой дрожжеподобных грибов является размножение почкованием (бластоспорами). Для идентификации дрожжеподобных грибов используют морфологические и биохимические критерии. Основными возбудителями в клинической практике являются виды родов Candida, Cryptococcus, Rhodotorula, Trichosporon u Geotrichum. Хотя грибы рода Geotrichum относятся к гифомицетам, они отличаются от других плесневых возбудителей, т.к. в норме являются сапрофи-тами слизистых оболочек верхних дыхательных путей, желудочно-кишечного тракта и кожи, вызывают клинические симптомы заболевания, схожие с кандидозом и на питательной среде образуют дрожже-видные колонии.
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.