Системные микозы. Основные методы лабораторной диагностики кандидозов и аспергиллезов: Методическая разработка для проведения практических занятий по клинической микробиологии, страница 6

Дифференциацию дрожжеподобных возбудителей проводят по макроморфологическим и микроскопическим особенностям. Для более точного определения грибов, используют биохимические тесты или коммерческие тест-системы, например «Fongiscreen 4H», "Auxacolon>, «BBL Mycotube».

Cryptococcus. Колонии кремовые или желтоватые, со временем - темнокоричневые. Гладкие, блестящие, слизистые. Преобладают округлые дрожжеподобные клетки размером от 6 до 20 мкм с одной почкой. Характерной чертой рода является наличие слизистой капсулы, которая хорошо видна при микроскопии колонии в тушевом препарате.

Rhodotorula. Колонии гладкие, округлые, розовато-красного или кораллового цвета. Микроскопически представлены сферическими, овальными почкующимися клетками размером 2,5-6,5 х 6,5-14,0 мкм.

Trichosporon. Колонии белые, желтоватые или кремовые гладкие или с морщинистой поверхностью, матовые с бахромчатыми краями. Формирует многочисленные псевдогифы и истинный мицелий, которые распадаясь, образуют артроспоры. Также присутствуют сферические, овальные бластоспоры размером 3,5-7,0 х 3,5-14,0 мкм. Тест на уреазную активность положительный.

Geotrichum. Колонии, преимущественно, плоские, беловато-сероватые, коричневатые. Образует прямоугольные или овальные артроспоры путем фрагментации мицелия. Бластоспоры отсутствуют. Тест на уреазную активность отрицательный.

Определение уреазной активности.

Исследуемую культуру засевают в бульон Кристенсена (см. раздел 3.3.1.) и инкубируют при 25-30 °С. Через 2-5 дней при разложении мочевины среда окрашивается в красный цвет.

Выделение и определение грибов рода Candida

Тактика выявления возбудителя приведена в схеме 1. После предварительной обработки патологического материала провопят исследование биосубстратов в нативном и окрашенном препаратах. Микроскопия биосубстратов в нативном препарате позволяет получить предварительный результат и определить тактику дальнейшего исследования. В случае обнаружения в каждом поле зрения (х 400), почкующихся дрожжевых клеток и кандидозного псевдомицелия готовят разведение посевного материала 1:10,1:100, 1:1000. Если клетки грибов не обнаруживают, то материал засевают неразведенный. При исследовании мокроты учитывают также количество плоского эпителия в мазке: содержание более 10 клеток эпителия в поле зрения при малом увеличении (х 100) свидетельствует о попадании содержимого полости рта в бронхиальный секрет во время сбора материала. В этом случае анализ рекомендуют повторить.

При исследовании ликвора в капле индийской туши одновременно проводят дифференциацию криптококковой инфекции (наличие нео-крашенных капсул дрожжевых клеток на сером фоне) от кандидозной. Обнаружение дрожжевых клеток в гное, соскобах с кожи, ногтей, в отделяемом наружного слухового прохода свидетельствует о возможном наличии кандидозной инфекции.

Дальнейшая микроскопия окрашенных мазков дополняет ориентировочные данные нативного исследования, выявляет сопутствующую        микрофлору (грамположительная и грамотрицательная бактериальная флора), ответную воспалительную реакцию организма (наличие полиморфноядерных лейкоцитов), помогает дифференцировать колонизацию грибами (носительство) от инфицирования.

Подготовленный жидкий биосубстрат засевают на агар Сабуро в количестве ОДмл и инкубируют при 37°С в течение 7 дней. Кровь без обработки и центрифугированный осадок ликвора засевают в жидкую среду Сабуро, затем через 2, 5, 7 дней пересевают на агар Сабуро. Гной, соскобы с кожи, ногтей, помещают на питательную среду без обработки.