Изучение флавоноидной фракции экстракта корня солодки в экспериментальной химиотерапии опухолей

Изучение флавоноидной фракции экстракта корня

солодки в экспериментальной химиотерапии опухолей

14.00.25 – фармакология, клиническая фармакология

Научный руководитель

Зав. кафедрой фармакологии ГОУ ВПО РГМУ Росздрава профессор, д.м.н.

Сроки выполнения: 2005-2008гг.

Место выполнения: кафедра фармакологии РГМУ

Актуальность

В настоящее время для лечения злокачественных опухолей в основном используются три метода лечения: химиотерапия, лучевая терапия и хирургический метод.

Препараты, которые используются в химиотерапии, агрессивны и действуют как на раковые клетки, так и на нормальные клетки организма и в высоких дозах обладают высокой токсичностью. На современном этапе требуется изыскание противоопухолевых препаратов с другим механизмом действия селективным в отношении опухолевых клеток.

Как доказано современными исследованиями биологически активные вещества растений перспективны с этой точки зрения.

Экстракт корня солодки обладает противовоспалительной, противоязвенной, противовирусной, антиоксидантной, антибактериальной, иммуномодулирующей, антиканцерогенной, гиполипидемической и противоопухолевой активностью. Экстракт корня солодки содержит биологически активные вещества с доказанной фармакологической активностью.

У флавоноидов на различных экспериментальных моделях доказано наличие противоопухолевой активности, которая обусловлена подавлением пролиферации злокачественных клеток и проапоптогенным действием.

В предыдущих исследованиях было доказано антипролиферативное  и проапоптогенное действие экстракта корня солодки не связанное с действием глицирризиновой кислоты.

Рис.1 Влияние ЭКС и глициризиновой кислоты на пролиферацию клеток лейкоза Р388

Рис.2 Влияние ЭКС и глицирризиновой кислоты на уровень апоптоза в культуре клеток линии Р388.

Цель исследования:

Изучить противоопухолевую активность флавоноидной фракции экстракта корня солодки и ее влияние на эффективность противоопухолевой химиотерапии.

Задачи:

1) Выделить флавоноидную фракцию экстракта корня солодки.

2) Изучить влияние флавоноидной фракции экстракта корня солодки на ростовые характеристики клеток различных опухолевых линий и на нормальные клетки in vitro (пролиферация, апоптоз, некроз).

3) Изучить противоопухолевую активность флавоноидной фракции экстракта корня солодки на различных моделях перевиваемых опухолей животных in vivo.

4)Оценить эффект комбинированной терапии с цитостатиками in vitro и in vivo.

Методики:

1)  Выделение флавоноидной фракции.

Стандартная методика экстракции флавоноидов с последующим разделением на полиамидном сорбенте и ТСХ – анализом полученных фракций.

Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм. Около 5 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл 95 % спирта, взвешивают с погрешностью ±0,01 г, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 1 ч. После охлаждения до комнатной температуры колбу вновь взвешивают и доводят до первоначальной массы 95 % спиртом.

Содержимое колбы фильтруют через воронку диаметром 5 см с вложенным ватным тампоном толщиной не более 0,5 см, отбрасывая первые 15 мл фильтрата; 25 мл фильтрата переносят в круглодонную колбу со шлифом вместимостью 50 мл и упаривают досуха под вакуумом на ротационном испарителе. Сухой остаток дважды обрабатывают 10 мл горячего 10 % раствора натрия хлорида, каждый раз нагревая содержимое колбы на кипящей водяной бане в течение 2 мин. Раствор охлаждают, фильтруют через воронку с ватным тампоном, смоченным водой, на колонку с полиамидным сорбентом.

Колонку промывают 30 мл воды, из них 10 мл используют для промывания фильтра, который после этого убирают. Когда над сорбентом останется слой жидкости толщиной 7-10 мм, водный элюат отбрасывают. Элюирование суммы флавоноидов проводят 25 мл 95 % спирта, который добавляют в колонку постепенно, порциями по 5 мл. Первые порции элюата (бесцветные и прозрачные) собирают в градуированную пробирку вместимостью 10 мл, диаметром около 1 см. Когда элюат приобретет окраску и объем окрашенного элюата в пробирке достигнет 1 мл, мерную пробирку убирают (граница раздела бесцветного водного и окрашенного спиртового слоев элюата в пробирке хорошо различима визуально). Элюат из пробирки отбрасывают. Последующие порции элюата собирают в мерную колбу вместимостью 25 мл.

2) Оценка пролифарации:

А) ³H – тимидиновый тест

Б) Оценка уровня апоптоза и некроза цитофлуориметрическим методом