Общие принципы диагностики в медицинской микробиологии, оценка результатов лабораторного исследования

ГЛАВА II. ОСНОВЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ микроОрганизмов

2.1. ОБЩИЕ ПРИНЦИПЫ ДИАГНОСТИКИ В МЕДИЦИНСКОЙ МИКРОБИОЛОГИИ.

ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ ЛАБОРАТОРНОГО ИССЛЕДОВАНИЯ

Главным методом диагностики в настоящее время остается бактериологический, состоящий из выделения чистой культуры возбудителя и определения его признаков.

Микроскопический метод выявляет бактерии только в случае нативного содержания в материале 10⁵ и более бактерий на мл и из-за близости морфологии бактерий позволяет отнести выявленную культуру только к крупным таксонам (грам(+), грам(-), бактерии, кокки, спирохеты и др.) Его результаты могут быть использованы для выбора питательных сред и предварительного суждения о возможном возбудителе. Введение в практику ИФА, проточной цитометрии бактерий и иммунофлуоресцентного метода расширило возможности микроскопического метода, но и в этом случае он не может заменить бактериологический метод, поскольку не позволяет установить чувствительность возбудителя к химиопрепаратам и ряд других свойств для установления источника инфекции. При идентификации грибов и простейших возможности микроскопического метода значительно шире.

Генетические методы. Внедренные в последнее время в лабораторную практику методы ДНК-гибридизации, цепной полимеразной реакции (ЦПР), несмотря на большую специфичность и высокую чувствительность около 10 микроорганизмов в мл или грамме исследуемого материала, обладают целым рядом недостатков, среди которых надо отметить более высокую стоимость одного определения, техническую и методическую сложность. Однако за генетическими методами, особенно ЦПР, будущее.  

Серологический метод имеет вспомогательное значение, так как с его помощью нельзя установить спектр и уровень активности антимикробных препаратов по отношению к возбудителю болезни и провести внутривидовое типирование. Ограничивают его возможности выраженная мозаичность антигенной структуры многих условно-патогенных микробов, наличие антител против них у здоровых людей и слабая выраженность иммунного ответа на антигены условно-патогенных микробов. При хронических и затяжных формах заболевания роль в диагностике возрастает. Серологические реакции ставятся обычно с аутокультурой, результат оценивается по нарастанию титра антител в процессе болезни более чем в 4 раза.

Экспериментальный метод или метод биопробы – основан на неодинаковой чувствительности разных лабораторных животных к определенным микроорганизмам (животных определенного вида, возраста и массы тела заражают чистыми культурами или исследуемым материалом). Как правило, при диагностике условно-патогенной флоры не используется из-за неспецифичности клинической картины, вызываемой этими микробами.

Аллергический метод – основан на постановке кожно-аллергических проб. Применяют для выявления гиперчувствительности к различного рода антигенам (аллергенам) при диагностике инфекционных заболеваний (туберкулез, бруцеллез и др.) На диагностическую ценность кожно-аллергических проб при заболеваниях, вызванных условно-патогенной флорой, существуют противоположные точки зрения. Одна - не применяется в связи с наличием сенсибилизации к представителям нормальной микрофлоры и связанной с этим малой специфичностью. Другая - может служить как критерий диагноза при хронических инфекциях, которые всегда сопровождаются аллергизацией макроорганизма.

Бактериологический (культуральный) метод. При использовании этого метода следует учитывать, что в патологическом материале от больного, как правило, присутствует ассоциация микроорганизмов, которая может включать возбудителей заболевания, заносные из других тканей и внешней среды виды, микробы, попавшие в материал при его заборе и доставке. Популяции возбудителей при этом выражено гетерогенны, изменчивы и их количественный состав варьирует у разных больных и меняется в процессе болезни, особенно при использовании антибактериальных препаратов. Интересы химиотерапии требуют определения чувствительности культур к антибиотикам и другим химиотерапевтическим препаратам, эпидемиологического анализа - фаговара, биовара, серовара и др. С целью определения смены возбудителей и изменения их свойств материал из открытых процессов исследуется каждые 5-7 дней.

Установленным является факт выраженной внутри- и межпопуляционной изменчивости условно-патогенных микробов. Представления о гетерогенности популяций микробов диктуют необходимость: а) резкого увеличения выборки (числа исследуемых культур одного вида) в процессе микробиологической диагностики; б) ориентации при выборе химиотерапевтических средств на варианты и штаммы возбудителя, обладающие наиболее широким спектром и наиболее высоким уровнем устойчивости к антибиотикам и антисептикам; в) динамичного наблюдения за количественными и качественными изменениями в составе популяции возбудителя и соответствующей изменениям коррекции схемы лечения; г) предупреждения суперинфекции патологических процессов как путем их герметизации (создания безмикробной среды), так и резкого снижения массивности микробной контаминации объектов больничной среды, с помощью которых происходит суперинфекция.

Межпопуляционная изменчивость условно-патогенных микробов проявляется в формировании и широком распространении в больничных стационарах госпитальных штаммов и эковаров, обладающих большей устойчивостью к антимикробным факторам больничной среды и элиминирующим факторам организма человека.

Принципы микробиологической диагностики условно-патогенных микроорганизмов

Лабораторная диагностика в клинической микробиологии направлена на решение трех основных задач:

1)   выявление и идентификацию возбудителя инфекции у больного до вида (при невозможности до рода);

2)   определение чувствительности выделенного микроорганизма к антимикробным препаратам;

3)   выбор рациональной антимикробной терапии на основе результатов лабораторного анализа.

Диагностические исследования, проводимые при заболеваниях, вызванных