Способ светооптического микроскопического исследования поверхности незаключенных пленочных препаратов биологических оболочек (Способ исследования поверхности биологических оболочек), страница 4

Фиг.3 - поверхность базальной мембраны диафрагмальной брюшины человека с параллельными и относительно регулярными (длиной волны 15-20 мкм) узкими складками. Объектив 25, окуляр 12,5; азимутальный угол освещения равен плюс 70 градусам.

Фиг.4 - Поверхность синовиальной мембраны наднадколенниковой синовиальной сумки человека (образована наряду с синовиоцитами и межклеточным веществом). Через отверстия визуализируется наличие дополнительной полости. Длина тени от краев больших отверстий на дно полости детерминирована глубиной полости и углом падения светового потока. Объектив 6,3; окуляр 12,5; азимутальный угол освещения равен плюс 120 градусам.

Полученные изображения позволяют осуществлять качественные исследования состояния поверхности гистологических препаратов.

Таким образом, предложенный способ позволяет повысить качество исследования рельефа поверхности гистологических препаратов, наблюдая ее в объемном изображении на тканевом уровне, что обеспечивает получение дополнительной достоверной информации о состоянии биологического объекта.

Формула изобретения

Способ исследования гистологических препаратов микроскопами плоского поля, отличающийся тем, что поверхности препарата придают светоотражательную способность путем импрегнации серебра, а микроскопию препарата осуществляют в отраженном свете при одностороннем падающем тенеобразующем освещении, причем импрегнацию серебра осуществляют выдерживанием препарата в 10% растворе азотнокислого серебра в течение 10 минут и последующим восстановлением его 1% раствором аскорбиновой кислоты в течение 1 минуты.

Изучение поверхности естественных оболочек является одним из наиболее информативных методов их исследования. Для этого из них изготавливают тонкие пленочные препараты. изучения поверхности естественных оболочек применяется плено. Микроскопия пленочных  препаратов позволяет легко изучить значительные площади естественных оболочек. В этом плане представляет особую ценность микроскопия незаключенных препаратов. Так, размеры готовых для микроскопии препаратов не лимитированы размерами покровных стекол, и даже не размерами предметных стекол. Линейные параметры перемещения препаратоводителей позволяют микроскопировать препараты брюшины, плевры размерами 8х5 см (обычные столики микроскопов К. Цейсс), то есть несколько больше чем площадь 2-х уложенных рядом предметных стекол. Подобного размера хорошего качества предметные стекла можно получить разрезав пополам стандартную фотопластинку толщиной 1,5 мм.

Забор материала. Толщина, как и ее равномерность, пленочного препарата для отраженной микроскопии не имеет большого значения. Легко снимаемые пленки можно было бы и отдирать (к примеру, чтобы получить косвенные данные о биомеханических свойствах сцепленности отдельных пластов пленок, рис. 13). Но при этом на отсепарованной поверхности образуется много вышедших из тканевой системы волокон, которые импрегнируются очень интенсивно (как демаскированные волокна), что мешает в случае микроскопии на просвет. Для отраженной микроскопии структур отсепарованной поверхности пленок (обратной стороны пленок), чтобы избежать значительной дезорганизации тканей, пленки надо отделять пользуясь острым лезвием. При этом желательно брать пленки с участками несколько разной толщины, что позволит микроскопировать структуры лежащие на разной глубине от поверхности.

Рис. 13. Висцеральная плевра человека, внутренняя сторона пленочного препарата, отделенного механическим путем. Импрегнация соединительной ткани для отраженной микроскопии. Среди дезорганизованных волокнистых структур сохрани-лось хорошо армированное ложе венулы диаметром около 60 мкм. Коллагеновые волокна диаметром около 5 мкм окружают сосуд перпендикулярно его оси примерно на полдиаметра и вплетаются в окружающую ткань (1). Они, в отличие от обычных волокон, лишены видимой извилистости (кривизна извилистости ориентирована  по окружности сосуда) и способны предотвратить расширение венулы во время вдоха.  Отраженная микроскопия в «темном поле зрения» при кольцевом косопадающем освещении. Эпиобъектив 12. Окуляр 12,5.

 

1

Микроскопия поверхности требует очень тщательного расправления пленочного препарата на предметном стекле. Этого можно легче достичь на незаключенном препарате. После просмотра его под микроскопом приходится многократно подправлять укладку препарата. Искусственные складки, валики затрудняют микроскопию, вносят искажения. Незаключенный препарат можно микроскопировать с двух сторон, многократно переворачивая его на предметном стекле. В случае надобности, его можно дополнительно импрегнировать. Кроме того, на незаключенном препарате можно проводить дополнительные манипуляции, к примеру, отслоить базальную мембрану (рис.11), отворачивать покровные мембраны для микроскопии их «изнутри» - снизу, со стороны полости (рис ), раскрывать (рис) тканевые щели микроинструментами (иголками).

-  (избыточного выхода жидкости из толщи брюшины на поверхность при ее обезвоживании», парадокс обезвоживания поверхности, феномен переувлажнения при обезвоживании, накопление жидкости на поверхности при ее обезвоживании, парадоксальный феномен увеличения количества жидкости на поверхности брюшины при ее высушивании)