Гипоксия (Задания для самостоятельной работы студентов), страница 5

2.  __________________________________________________________________________________________________________________________________________________

3.  __________________________________________________________________________________________________________________________________________________

6. Практическая часть

Опыт 1. Демонстрация экзогенной гипоксии.

Опыт ставится на двух мышах. Интактную мышь и мышь, предварительно подвергавшуюся воздействию гипоксических смесей (1-й день — 8% О₂, 2-й день — 6% О₂, 3-й — день 5% О₂), помещают в колбу, снабженную пробкой с отводом и заполненную чистым азотом. Колбу закрывают и наблюдают картину кислородного голодания у животных до их гибели; производят вскрытие. Берут кровь для спектроскопического исследования: во вскрытую грудную полость животного пастеровской пипеткой вводят 2 капли 7% раствора лимонно-кислого натрия; затем из грудной полости набирают 2 капли нитратной крови, вносят в пробирку и добавляют 5 мл дистиллированной воды.

При проведении спектроскопии спектр оксигемоглобина содержит две четкие полосы поглощения в желто-зеленой части. Для дифференциальной диагностики карбоксигемоглобина в пробирку добавляют 5 капель 0,5% раствора фенилгидразина (восстановитель). Если карбоксигемоглобина нет, то две полосы спектра исчезают и заменяются сплошной широкой полосой, характерной для восстановленного гемоглобина. При наличии карбоксигемоглобина полосы остаются неизмененными.

Метгемоглобин определяют по наличию полосы поглощения в красной части спектра. Однако при небольшой концентрации метгемоглобина в крови эта полоса выражена нечетко. Рекомендуют добавлять в разведенную кровь 5 капель 4% раствора фтористого натрия. Образующийся фтор-гемоглобин дает хорошо видимую полосу поглощения в оранжевой зоне. Отсутствие полосы свидетельствует об отрицательном результате анализа.

Опыт 2. Демонстрация дыхательной гипоксии.

1. Асфиксия, вызванная сжатием трахеи подопытной мыши.

Находящуюся под гексеналовым наркозом крысу помещают на дощечке спиной вниз. Срединным разрезом кожи обнажают трахею и подводят под нее лигатуру. На протяжении всего опыта производят запись дыхательных движений грудной клетки на кимографе и запись электрокардиограммы. Лигатурой пережимают трахею и наблюдают последовательность развития стадий асфиксии. Погибшее животное вскрывают и изучают признаки смерти от асфиксии.

2. Отравление подопытной мыши углекислым газом.

Колбу заполняют газовой смесью, состоящей из 21% О₂ и 79% СО₂. В эту смесь газов помещают мышь, и колбу закрывают пробкой. Наблюдают за изменением дыхания и поведением животного до его гибели.

Опыт 3. Демонстрация кровяного типа гипоксии

1.  Отравление подопытной мыши метгемоглобинообразователями.

Опытной мыши подкожно вводят 0,07–0,1 мл 1% раствора азотисто-кислого серебра на 1 кг массы тела, и наблюдают картину кислородного голодания. Погибшую мышь вскрывают, отмечают окраску крови и внутренних органов. Кровь берут для спектроскопического анализа.

2.  Отравление подопытной мыши окисью углерода.

Мышь помещают в банку, соединенную шлангом с краном газовой сети. Постепенно впускают газ в банку в течение 5–10 мин. Наблюдают картину кислородного голодания. Погибшую мышь вскрывают, отмечают окраску крови и внутренних органов. Кровь берут для спектроскопического исследования.

Оформите протокол опытов: