Вспомогательную роль в диагностике описторхоза играют методы иммунодиагностики. С применением иммуноферментного анализа возможно выявление антител к описторхозному антигену в высоком титре (1:400, 1:800) в острую фазу описторхоза ( в первые 3 недели заболевания). Обнаружение антител у этих больных должно быть поводом для дальнейшего обследования с целью обнаружения яиц описторхисов в желчи или фекалиях после 3-й недели болезни. У большинства больных хроническим описторхозом титры специфических антител в ИФА бывают низкими (1:100,1:200) или реакция бывает отрицательной, поэтому ИФА малоинформативен для диагностики этой фазы болезни. Исключение составляют случаи суперинвазии при хроническом описторхозе, протекающие с эозинофилией.
Тонкослойный иммунный анализ с аутосывороткой (ТИА) позволяет одновременно выявлять секреторно-экскреторные антигены описторхисов в фекалиях и специфические антитела в сыворотке крови (приложение 2). Диагностическая ценность метода не менее 75% как при остром, так и при хроническом описторхозе.
ПРИЛОЖЕНИЕ 1.
ТОЛСТЫЙ МАЗОК ПОД ЦЕЛЛОФАНОМ (МЕТОД КАТО, 1954).
Толстый мазок представляет собой слой неразбавленных фекалий на предметном стекле, спрессованный под листком тонкого гигроскопичного целлофана, предварительно пропитанного глицерином. В условиях сухого теплого воздуха слой фекалий в результате потери влаги и абсорбции глицерина просветляется, яйца описторхисов приобретают четкую видимость и определяются при малом увеличении.
Кусочек целлофановой пленки размерами 20 на 30 мм и толщиной 40-50 мкм помещают не менее чем за 24 ч до анализа в 50% раствор глицерина. К 200 мл раствора добавляют 1 мл 3% водного раствора малахитовой зелени для снижения утомляемости глаза. На предметное стекло наносят 50-60 мг фекалий (около 0,4 мл), покрывают целлофановой полоской и раздавливают резиновой пробкой для получения тонкого ровного слоя. Мазок оставляют на 1 ч при комнатной температуре или в сушильной шкафу при 45 на 15-20 мин.
ЭФИР-УКСУСНЫЙ МЕТОД КОПРООВОСКОПИИ
(Павлюков И.А., Березанцев Ю.А.)
В градуированную центрифужную пробирку наливают 7 мл 10% раствора уксусной кислоты и добавить 1 г кала (до объема 8 мл). Тщательно размешавают стеклянной или деревянной палочкой и через воронку с 1 слоем марли сливают в другую центрифужную пробирку. Добавляют 2 мл этилового эфира, закрывают пробирку и встряхивают в течение 10 сек. Далее пробирку без пробки центрифугируют при 1500 об/мин в течение 2 мин. Надосадочную жидкость сливают. Осадок пипеткой переносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом (24 на 24 мл) исследуют под микроскопом при малом увеличении.
ПРИЛОЖЕНИЕ 2.
ТОНКОСЛОЙНЫЙ ИММУННЫЙ АНАЛИЗ
С АУТОСЫВОРОТКОЙ (ТИА).
Чашки Петри ополаскивают этиловым спиртом, высушивают на воздухе и заливают агаром с толщиной слоя 3 мм. После застывания агара в нем пробивают 3 лунки диаметром 3 мм. В каждую лунку вносят по 0,025 мл сыворотки крови исследуемого больного. Чашки Петри помещают в эксикатор, заполненный водой, и выдерживают при температуре 37 С в течение 48 ч. Затем лунки отмывают водой.
В одну лунку вносят 0,025 мл антигена описторхисов (концентрация белка 2 мг/мл). В другую лунку вносят 0,025 мл надосадочной жидкости фекалий больного. (Для получения надосадочной жидкости 1 г фекалий больного помещают в центрифужную пробирку, добавляют 9 мл 0,85% раствора хлорида натрия. Содержимое перемешивают и кипятят над пламенем спиртовки 5 мин.) В третью лунку вносят 0.025 мл изотонического раствора хлорида натрия (контроль).
Чашки закрывают и выдерживают при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем агар удаляют, чашки ополаскивают водой и высушивают в токе воздуха. Чашки экспонируют над водяной баней при температуре 56 С в течение 1 мин на расстоянии 8-10 см от поверхности воды. Реакция считается положительной, если в месте контакта сыворотки и с надосадочной жидкостью фекалий, и с описторхозным антигеном образовались крупные капли конденсата, а на других, не сенсибилизированных сывороткой участках, - мелкие капли.
Таким образом, реакция ТИА считается положительной в случае обнаружения и антигенов описторхисов в фекалиях, и противоописторхозных антител в сыворотке крови.
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.