Хроматографическое разделение смесей органических соединений. Флуоресценция. Электрофорез. Хроматография на бумаге. Тонкослойная хроматография

Министерство образования Республики Беларусь

Международный государственный экологический

университет  им. А. Д. Сахарова

Факультет радиобиологии и экологической медицины

Кафедра биохимии и биофизики

Теоретический материал

к дисциплине

«Большой спецпрактикум»

Минск

МГЭУ

2009

Содержание

1. Хроматографическое разделение смесей

органических соединений

Хроматография, являющаяся эффективным методом разделения и идентификации химических соединений, была разработана в 1906 г. русским ботаником Михаилом Цветом для изучения растительных пигментов. При фильтрации растворов пигментов в петролейном эфире через узкую стеклянную колонку, заполненную карбонатом кальция, он наблюдал разделение исходной смеси на окрашенные зоны в соответствии с эффективностью адсорбции пигментов на данном адсорбенте. Эти зоны перемещались в колонке с различными скоростями. Если затем вместо раствора смеси пигментов в колонку подавали только чистый растворитель, то зоны перемещались до тех пор, пока не завершалось их разделение. После разделения он или извлекал адсорбент из трубки, разрезал его на зоны и отдельно экстрагировал каждую зону или продолжал вводить растворитель, постепенно элюируя отдельные зоны из трубки, а потом выпаривал полученные растворы. Цвет назвал этот метод  хроматографией, хотя вполне сознавал, что таким же способом можно разделять и неокрашенные соединения.

Все же хроматография стала по-настоящему серьезным методом только в  1944 г., после работ Арчера Мартина и Джона Синджа, получивших Нобелевскую премию за разработку методологии распределительной хроматографии.

В настоящее время известно большое число различных видов хроматографии (распределительная, адсорбционная, ионообменная, эксклюзионная, аффинная) и различных приемов их применения (колоночная, на бумаге, тонкослойная, газовая). Это обусловлено тем, что каждый метод используется  для решения конкретных задач, начиная от необходимости получения относительно больших (препаративных) количеств чистого вещества и кончая аналитическими процедурами, позволяющими идентифицировать индивидуальные вещества в биологических образцах.

          Хроматографические методы подразделяются на две осовные группы в зависимости от агрегатного состояния используемой подвижной фазы. К этим группам относятся газовая и жидкостная хроматографии.

В газовой хроматографии подвижной фазой является газ-носитель, а в качестве неподвижной фазы используется твердое вещество или нелетучая жидкость. В свою очередь газовая хроматография подразделяется на газо-твердофазную и газо-жидкостную. В случае газо-жидкостной хроматографии нелетучая жидкость должна быть закреплена (иммобилизована) на соответствующем твердом носителе.

          В жидкостной хроматографии подвижная фаза представляет собой жидкость, а неподвижной фазой может быть твердое вещество или другая жидкость, не смешивающаяся или частично смешивающаяся с подвижной