Спектрофотометрия. Приготовление исходных буферных растворов

Лабораторная работа №1.

Спектрофотометрия.

Приготовление исходных буферных растворов.

Проверили показания прибора посредством буферных растворов с определенной рН.

Затнм приготовили буферные растворы с Рн 3,9, 4,1, 4,3 с помощью 0,2М раствора NaOH и 0,4М раствора муравьиной кислоты.

Рабочие растворы .

Далее приготовили рабочие растворы:

№1 (кислый) 9мл 6,6*10(-6)М раствор цитидина + 1мл 0,1М HCl.

№2 (щелочной) 9мл ----------                                   + 1мл 0,1М NaOH

№3 (буферный) 9мл ----------                                   + 1мл буфера рН=3,9

№4 (буферный) 9мл ----------                                   + 1мл буфера рН=4,1

№5 (буферный) 9мл ----------                                   + 1 мл буфера рН=4,3

№6 (кислый) 7мл -------------                                    +1мл 0,1М HCl + 2мл воды

№7 (кислый) 5мл -------------                                    +1мл 0,1М HCl + 4мл воды

№8 (кислый) 3мл -------------                                    +1мл 0,1М HCl + 6мл воды.

Контрольные растворы готовились аналогично, только вместо раствора цитидина – вода.

Определение характеристической длины волны и изобестической точки.

Длина волны	№1	№1	№1	№2	№2	№2
	D'	D''	Dср	D'	D''	Dср
0,24	0,11	0,091	0,1005	0,399	0,329	0,364
0,245	0,119	0,122	0,1205	0,37	0,294	0,332
0,25	0,15	0,154	0,152	0,337	0,278	0,3075
0,255	0,222	0,209	0,2155	0,337	0,287	0,312
0,26	0,304	0,28	0,292	0,37	0,298	0,334
0,265	0,4	0,38	0,39	0,396	0,336	0,366
0,27	0,502	0,475	0,4885	0,421	0,358	0,3895
0,275	0,577	0,56	0,5685	0,407	0,352	0,3795
0,28	0,594	0,554	0,574	0,333	0,284	0,3085
0,285	0,552	0,504	0,528	0,227	0,229	0,228
0,29	0,481	0,417	0,449	0,15	0,113	0,1315
0,295	0,272	0,272	0,272	0,057	0,016	0,0365
0,3	0,112	0,081	0,0965	0,028	0,006	0,017
0,305	0,016	0,025	0,0205	0,023	0,011	0,017
0,31	0,002	-0,009	-0,0035	0,019	-0,025	-0,003

Характеристическая точка – №1 – 0,280

                                                 №2 – 0,275

Изобестическая точка –  0,265

Проверка закона Бера.

Раствор	Оптическая плотность
1	0,567
3	0,461
4	0,266
5	0,207

Из графика видно, что закон Бера верен в данном случае.

Определение  (мольный коэффициент поглощения или молярная экстинкция)

= , где - полученная оптическая плотность, L – толщина раствора в кювете, m – концентрация.

= 0,0998*

= 0,0806*

= 0,1045*

Определение оптической плотности буферных растворов на характеристической длине волны.

№	рН	μ	lgγ±	D	lg(1-α)/α	pKa	Ka	<Ka>
3	3,9	0,01	-0,044	0,476	-0,368	4,312	4,144	0,7
4	4,1	0,01	-0,044	0,458	0	4,144		0,5
5	4,3	0,01	-0,044	0,442	0,368	3,976		0,3