Микробиология: Лабораторный практикум, страница 39

Среда Эндо готовится на 2-3 суток. При более длительном хранении ее необходимо держать в холодильнике.

Пересев со среды Булира на среду Эндо производят следующим образом: карандашом по стеклу размечают дно чашки на сектора по числу пробирок, в которых обнаружено помутнение и газообразование. Из каждой пробирки, захватив небольшое количество материала, делают высев с помощью петли в соответствующий сектор на чашку. Посев делают штрихом, проводя петлей зигзаг по поверхности агара для получения изолированных колоний. Чашки с посевом помещают в термостат при 37°С на 24 ч.

По окончании срока выращивания колонии исследуют. При развитии на среде Эндо типичная кишечная палочка образует ха­рактерные колонии красного цвета с металлическим блеском, иногда темно-красные и розовые с темным центром.

Если бродильная проба на среду Булира положительная и культура на среде Эндо имеет ярко-красные колонии, можно считать установленным присутствие в исследуемых пробах БГКП.

Из типичных колоний следует приготовить мазки и окрасить их по Граму. Обнаружение в мазках грамотрицательных палочек подтверждают наличие бактерий кишечной группы.

Задание

1. Определить общее количество микроорганизмов в 1 мл исследуемой воды (подсчет колоний на МПА).

2. Определение титра кишечной палочки в воде методом бродильных проб.

Исследование микрофлоры воздуха

Воздух не является благоприятной средой для развития микроорганизмов, однако количество их может быть значительно. Содержание микробов в воздухе помещений зависит от разнообразных причин и условий. Особенно сильно загрязняется воздух микроорганизмами при наличии пыли и большой скученности людей.

На пищевых производствах приходится считаться с воздухом, как с фактором загрязнения полуфабрикатов и готовой продукции нежелательной микрофлорой.

Для исследования загрязненности воздуха микроорганизмами предложено несколько методов. Наиболее простым является метод оседания микроорганизмов на поверхность плотной питательной среды (седиментационнный метод Коха).

Для выполнения работы берут 2 стерильные чашки Петри, в одну из них наливают 10-15 мл мясопептонного агара, а в другую – соответствующее количество суслового агара. После застывания среды чашки подсушивают в термостате для удаления с поверхности среды влаги.

Закрытые чашки вносят в помещение, где исследуется воздух, ставят их на горизонтальную поверхность, снимают крышки и кладут одним краем на бумагу, а другим на край открытой чашки.

Чашки оставляют открытыми на 5-10 минут. После выдержки чашки закрывают и ставят перевернутыми в термостат с  MПА при температуре 37°С на 1-2 суток, а с сусловым агаром на 2-3 суток при 30°С.

Количество выросших колоний характеризует загрязненность воздуха.

Для пересчета количества микробов на 1 м воздуха пользуется формулой В.Л. Омелянского, согласно которой в течение 5 мин. на площадь 100 см² (плотной питательной среде) оседает столько микробов, сколько их содержится в 10 л воздуха (1/100 м ) при условии, если воздух находится в состоянии покоя. В зависимости от диаметра и площади чашек Петри были рассчитаны постоянные множители, на которые надо умножать число колоний, выросших на данной чашке.