Микробиология: Лабораторный практикум, страница 17

в) выделения и сохранения чистых культур микроорганизмов;

г) определения антагонистических свойств и в ряде других случаев.

Элективные среды по сравнению с универсальными обеспечивают преимущественное развитие одного вида (или нескольких) и мало пригодны для развития большинства микроорганизмов. Применяются, главным образом, для выделения микроорганизмов из мест их естественного обитания, а также получения чистых культур из смешанных. Сопутствующие микроорганизмы на элективной среде или совсем не будут развиваться или их развитие наступит позднее. В качестве примеров элективных питательных сред можно указать МПБ и МПА с 8% поваренной соли для культивирования стафилококков, или пиво с добавлениями 2-4% этилового спирта, для выращивания уксуснокислых бактерий. Для определения потребности микроорганизмов в отдельных элементах питания применяются также синтетические среды, которые приготовляют путем подбора и смешивания различных химических соединений. Примером такой среды являются синтетическая среда-агар Чапека для культивирования мицелиальных (плесневых) грибов. Известно, что важное, иногда решающее влияние на жизнедеятельность микроорганизмов, оказывает реакция среды, т.е. степень ее кислотности или щелочности. При этом реальное влияние оказывает не простое наличие кислоты или щелочи в растворе, а активная кислотность среды, которая зависит от концентрации водородных ионов в среде, т.е. от степени диссоциации кислоты или щелочи на ионы.

Для выражения активной кислотности среды служит условный символ рН, который представляет собой отрицательный логарифм концентрации водородных ионов, взятый с обратным знаком.

Разные виды микроорганизмов развиваются только в определенных границах рН. Для большинства плесневых грибов и дрожжей, молочнокислых, уксуснокислых бактерий наиболее благоприятна слабокислая среда (рН 4,0 -6,0), остальные бактерии развиваются в нейтральной или слабощелочной среде (рН 6,8-8,0).

При изготовлении питательных сред необходимо каждый раз устанавливать их реакцию. Если реакция не соответствует требованиям данного вида микроорганизма, то среду следует подщелачивать или подкислять, добавляя растворы соответствующих веществ, для подщелачивания — 0,1 nNaOH или 10% раствор питьевой соды, для подкисления - 0,1н. НС1 или слабый раствор молочной кислоты. РН среды определяют рН-метром с точностью до 0,2-0,3, или с помощью универсального индикатора.

Из числа плотных питательных сред в микробиологической практике наиболее широко для культивирования разных групп бактерий применяется мясопептонный агар (МПА), а для грибов сусло-агар (СА) и синтетическая среда Чапека (ЧА). Питательные (стандартные) среды-мясопептонный бульон (МПБ), мясопептонный агар (МПА), агар Эндо и некоторые другие в настоящее время выпускают в виде сухих порошкообразных концентратов. Из них в лабораторных условиях готовят среды, используемые в работе. Способ приготовления указан на этикетке.

Сусловый агар готовят на основе неохмеленного солодового сусла, которое можно получить на пивоваренных заводах или изготовить в лабораторных условиях.

Для приготовления плотной среды к разбавленному суслу добавляют 2-2,5% агара, расплавляют его при 100°С, фильтруют через вату покрытую марлей, разливают в соответствующую посуду и стерилизуют при 0,5 атм. В течение 20 мин.

Для культивирования мицелиальных грибов кроме сусло-агара в практике используют также синтетические среды, например агар Чапека, (см. приложение).

Способы и режимы стерилизации питательных сред, воды и посуды

Стерилизацией называется полное уничтожение микроорганизмов в каком-либо объекте: питательных средах, воде, посуде, инструментах и др.

Все подготовленные среды, вода для разведения, а также чистая посуда, применяемая для посева и выращивания микроорганизмов (пипетки, чашки Петри, пробирки, колбы), перед началом микробиологических исследований должны быть обязательно простерилизованы. Питательные среды стерилизуются тотчас после приготовления. Колбы и пробирки с питательными средами и водой перед стерилизацией закрывают ватными пробками. Ватные пробки выполняют роль фильтров и предохраняют простерилизованный материал от попадания посторонних микроорганизмов из воздуха.