Систематика и номенклатура микроорганизмов. Морфология бактерий. Специальные методы микроскопии

ВОЕННО-МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ

кафедра микробиологии

“ УТВЕРЖДАЮ”

НАЧАЛЬНИК КАФЕДРЫ полковник медицинской службы

------------------------------

“----” ----------------------- 199--- года

ПЛАН-КОНСПЕКТ

проведения лабораторного занятия по микробиологии на ФПВ

N 2

Тема:

“СИСТЕМАТИКА И НОМЕНКЛАТУРА     МИКРООРГАНИЗМОВ. МОРФОЛОГИЯ БАКТЕРИЙ.

СПЕЦИАЛЬНЫЕ МЕТОДЫ МИКРОСКОПИИ”.

Санкт-Петербург-1996 г.

1. ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ:  

научить курсантов специальным методам микроскопии (темнопольной, фазовоконтрастной, люминисцентной).

Учебное время: 4 часа (самостоятельная  работа под руководством преподавателя - 1 час).

II. ВВЕДЕНИЕ (5 мин).

На данном занятии будут рассмотрены специальные методы микроскопических исследований применяемых в микробиологии: темного поля, фазовоконтрастной микроскопии и люминисцентного анализа. Первые два метода позволяют повысить контрастность полупрозрачных и прозрачных, а поэтому плохо различных микроскопических объектов. Метод люминисцентной микроскопии дает получить цветное контрастное изображение. Мы научимся также определять подвижность бактерий.

III. КОНТРОЛЬ ИСХОДНОГО УРОВНЯ ЗНАНИЙ КУРСАНТОВ (15 мин).

Опрос письменный. Варианты вопросов:

1. Для какой цели необходимы микроскопические методы исследования.

2. Какие методы микроскопических исследований вам известны.

3. Простые методы окраски микроорганизмов.

4. Принцип окраски микроорганизмов по Граму.

5. Принцип окраски микроорганизмов по Цилю-Нильсену.

6. Устройство и принцип работы темнопольного конденсора.

7. Принцип работы фазовоконтрастного устройства.

8. Устройство и принцип работы люминисцентного микроскопа.

Конденсор темного поля: метод микроскопии в темном поле предложен Р.Зигмонди и Р.Зидентопфом в 1903 г. Метод позволяет обнаруживать ультрамикроскопические частицы, которые по своим размерам во много раз меньше предела разрешающей способности биологического микроскопа. Его используют главным образом при изучении коллоидных растворов. Непосредственно определить форму и размер частиц не удается. В микробиологии этот метод позволяет повысить контрастность обьекта относительно общего фона зрения микроскопа. Это имеет большое  значение для изучения подвижности микробов, которые в живом состоянии являются слабоконтрастными и не видны в обычном микроскопе.

Микроскопия в темном поле основана на явлении дифракции света при сильном боковом освещении взвешенных в жидкости мельчайших частиц (эффект Тиндаля - свечение пылинок в воздухе темного помещения, в которое солнечный луч проникает через небольшую щель).

Для создания темного поля в биологическом микроскопе применяют: щелевой метод, затемнение обьектива, специальные конденсоры которыми заменяют обычный конденсор в биологическом микроскопе.

Параболоид-конденсор имеет затемнение в центре, задерживающее центральные лучи света, и внутреннюю вогнутую поверхность (зеркальную) для отражения краевых лучей.

В кардиоид-конденсоре лучи вначале отражаются от выпуклой зеркальной поверхности, затем - от вогнутой.

Краевые лучи, выходящие из темнопольного конденсора, проходят в косом направлении и не попадают в обьектив, поэтому поле зрения микроскопа остается темным. В обьектив попадают лучи, отраженные от обьекта, в связи с чем в поле зрения можно наблюдать характерное изображение - на темном поле ярко светятся  микробные клетки и другие частицы, находящиеся в препарате.

Чтобы в обьектив не попадали прямые лучи от осветителя, апертура его должна быть меньше, чем апертура конденсора.  Для уменьшения апертуры в обычный обьектив помещают диафрагму или пользуются специальными обьективами, снабженные ирисовой диафрагмой.

Обычно с помощью темнопольной микроскопии изучают препараты типа “раздавленная капля”. При этом очень строгие требования предьявляются к качеству