Прикладные аспекты иммунологии. Реакция непрямой гемагглютинации. Последовательность реакций комплемента

Страницы работы

Фрагмент текста работы

УЧЕБНОЕ ВРЕМЯ: - 2 часа + 2 часа самостоятельного занятия под руководством преподавателя № 2.

I. ВВЕДЕНИЕ - 5 мин.

Специфические иммунологические реакции (РНГА, РСК, ИЛМ и ИФА) имеют большое значение в практической работе военного врача. С их помощью осуществляется иммунологическая диагностика большинства инфекционных заболеваний, специфическая индикация бактериологического оружия. Большой вклад в совершенствование РНГА внесли Кравченко А.Т., Соколов М.И. Королюк А.М., бывший начальник кафедры микробиологии разработал  РНГА для диагностики псевдотуберкулеза, а Сбойчаков В.Б. разработал ИФА для диагностики этой инфекции.

Знание основных принципов иммунологических реакций необходимы военному врачу любой специальности.

II. КОНТРОЛЬ БАЗИСНЫХ ЗНАНИЙ И ИСХОДНОГО УРОВНЯ ЗНАНИЙ КУРСАНТОВ - 15 мин (устный опрос).

Варианты вопросов:

1. Сущность РНГА, оценка её результатов.

2. Что такое лизины.

3. Что такое комплемент и его свойства.

4. Сущность РСК.

5. Что такое реакция иммунолюминисценции.

6. Что такое иммунная люминисцирующая сыворотка.

7. Устройство МЛД.

1. В основе реакции прямой гемагглютинации лежит способность эритроцитов склеиваться при адсорбции на них определённых антигенов. Поскольку это происходит без участия иммунной сыворотки, реакция не является серологической. В серологических исследованиях реакцию прямой гемагглютинации применяют для выбора рабочего разведения антигена, используемого в реакции торможения гемагглютинации. В основе последней лежит задержка гемагглютинирующего действия антигена специфической сывороткой.

Реакция непрямой гемагглютинации ( пассивная гемагглютинация) наступает в том случае, когда к эритроцитам, сенсибилизированных антигеном, т.е. несущим на себе адсорбированный антиген, добавляют иммунную сыворотку, соответствующую антигену. Эта реакция часто превосходит по чувствительности и специфичности другие серологические методы, её применяют при инфекциях, вызванных бактериями и риккетсиями.

В реакции используют эритроциты (баран, обезьяна, морская свинка, петух, гусь, человека I(О) группы. Кровь собирают стерильно в ёмкость с цитратом. Осадок эритроцитов 3 раза промывают 10 объёмами изотонического раствора хлорида натрия. На каждом этапе центрифугируют при 1000 об/мин в течении 10 минут, надосадочную жидкость сливают.

Для повышения способности  поверхности эритроцитов адсорбировать антигены их обрабатывают танином 30 мин при комнатной температуре, центрифугируют, сливают надосадочную жидкость, осадок промывают фосфатно-буферным раствором и доводят до исходной 2,5% взвеси эритроцитов.

Реакцию непрямой или пассивной гемагглютинации (РНГА или РПГА) с танизированными эритроцитами проводят в двух вариантах: с известным антигеном для обнаружения антител (по Бойдену) и с известными антителами (сывороткой) для выявления антигену (по Рыцаю). Антигенами в реакции непрямой гемагглютинации могут служить очищенные антигены соответствующих микробов, экстракты бактериальных взвесей, надосадочные жидкости формализованных, спиртовых, гретых бактериальных вакцин.

1. Реакция непрямой гемагглютинации для обнаружения антител. Диагностикум состоит из эритроцитов сенсибилизированных соответствующим антигеном.

Исследуемую сыворотку до разведения инактивируют 30 мин при 56о С. Для постановки РНГА сыворотку разводят от 1:10 до 1:1280. Разведённую сыворотку разливают по 0,25-0,5 мл. К каждому разведению сыворотки добавляют 0,25 мл 0,5-1% взвеси сенсибилизированных антигеном эритроцитов. Учёт результатов производят через 2 ч содержания в термостате при 37о С при условии осаждения эритроцитов в контрольных пробирках и вторично через 24 ч стояния при комнатной температуре. Вынимать из термостата штативы с пробирками или планшеты следует осторожно, не встряхивая.

Контролем специфичности реакции служит постановка РНГА с заведомо иммунными сыворотками в тех же разведениях.

Результаты учитывают по четырехплюсовой системе. Оценка результата зависит от характера осадка эритроцитов.

++++ - резкоположительная реакция, эритроциты равномерно покрывают всю лунку пластины в виде зонтика с неровными краями;

+++ - на фоне склеившихся эритроцитов в виде плёнки, имеется в центре небольшое кольцо из осевших несклеившихся эритроцитов;

++ - несколько меньшая степень агглютинации с большим количеством

Похожие материалы

Информация о работе

Предмет:
Микробиология
Тип:
Конспекты лекций
Размер файла:
44 Kb
Скачали:
0