Обезвоживание, просветление и заключение препарата в бальзам между предметным и покровным стеклами исключаются, так как этап обезвоживания необходим для пропитывания препарата бальзамом, а этап просветления препарата необходим для улучшения просвечивания при микроскопии в проходящем свете.
исключив, соответственно, и предшествующие ему процедуры обезвоживания и просветления. При микроскопии поверхности оболочек на влажных препаратах происходит также значительная экономия времени, за счет исключения времени, затрачиваемой на заключение препарата. (+ Способ хранения незаключенного пленочного препарата.)
Размеры готовых для микроскопии влажных препаратов не лимитированы размерами покровных и предметных стекол. При микроскопии поверхности влажных препаратов имеется возможность дальнейших манипуляций с изготовленным для микроскопии препаратом для получения дополнительной информации и повышения ее достоверности. Обычно, это следующие манипуляции: расширение естественных борозд для изучения структур их дна, расправление искусственных борозд и возвышений растягиванием препарата за края; отведение от интересующей зоны поверхности многочисленных реактивных структур – ворсин, трабекул, отворачивание последних и визуализация структур зон их прикрепления. Это также проникновение вглубь – в толщу препарата по ходу отверстий и люков на поверхности оболочек с помощью игольчатых расширителей. С другой стороны, имеется возможность полного разворачивания препарата для микроскопии обратной его стороны. Так можно уточнить строение глубоких волокнистых слоев, глубины проникновения люков, полостей люков под конкретными порами на поверхности и др. При работе с незаключенными препаратами становится возможным изучения динамики проникновения красителей, движения и растекания жидкостей по структурам, визуализация феномена избыточного выжимания жидкости из брюшины на поверхность при ее обезвоживании. С заключенным препаратом проделать все это невозможно.
Незаключенные влажные импрегнированные серебром препараты хранятся в герметично закрытом флаконе в 70% водно-спиртовом растворе неограниченное время. По мере надобности препараты извлекаются из флакона, расправляются на стекле и микроскопируются в отраженном свете, после чего снова кладутся во флакон. Исследования на наличие микробной флоры содержимого флакона в течение 3 лет их хранения и пользования дают отрицательный результат. Содержание серебра в препаратах и в растворе высокое и достаточное для постоянной и многократной их дезинфекции.
Поставленная задача достигается способом исследования рельефа поверхности гистологических препаратов микроскопами плоского поля, в котором в отличие от прототипа микроскопию проводят в отраженном свете при одностороннем падающем тенеобразующем освещении, а поверхности препарата придают светоотражательную способность путем импрегнации серебра. При этом импрегнацию серебра осуществляют выдерживанием препарата в 10% растворе азотнокислого серебра в течение 10 минут и последующим восстановлением его в металлическое состояние 1% раствором аскорбиновой кислоты в течение 1 минуты.
Способ осуществляется следующим образом.
Перед микроскопией поверхность препарата подвергают серебрению для придания ей светоотражательной способности.
Для этого фиксированные в формалине пленочные препараты оболочек с естественной поверхностью (брюшина, плевра, слизистые, синовиальная мембрана и др.), расправленные кусочки диафрагмы, кишечной стенки, капсулы суставов, участок суставного хряща и др. промываются в водопроводной воде в течение суток и споласкиваются в дистиллированной воде. Толщина препарата для микроскопии в отраженном свете не имеет принципиального значения.
Затем осуществляют экспозицию кусочков в 10% растворе азотнокислого серебра в течение 10 минут, восстановление серебра 1% раствором аскорбиновой кислоты в течение 1 минуты.
Далее как обычно: остановка проявления в аммиачной воде, промывание в дистиллированной воде, заключение в бальзам.
Подготовленные таким образом препараты исследуют посредством микроскопа плоского поля с объективами до 50 кратного увеличения (общее увеличение до 350-500 раз), позволяющего визуализировать объемную картину рельефа поверхности на тканевом уровне исследований. Микроскопию препарата проводят в отраженном свете при одностороннем падающем тенеобразующем освещении. Источник света устанавливается сбоку и выше уровня столика микроскопа. Оптимальным тенеобразующим является угол падения светового луча на препарат в пределах 75-85 градусов. Для выявления особенностей строения отдельных структур рельефа изменяется угол падения и азимут светового луча.
На фотографиях показаны примеры полученных с помощью предложенного способа изображений, где четко визуализирован рисунок и рельеф поверхности препарата.
Фиг.1 – поверхность плевры человека с рельефом складок и контурами клеток мезотелия. Объектив 50, окуляр 6,3; освещение справа – азимутальный угол освещения равен минус 90 градусам.
Фиг. 2 – поверхность базальной мембраны брюшины человека с подлежащими жировыми дольками, формирующими округлые возвышения с крутыми склонами 1. Объектив 12, окуляр 12,5; азимутальный угол освещения равен минус 90 градусам.
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.