микроманипуляционной техники и микрохирургического вмешательства, был разработан R. Gardner (1968). При инъекционном методе используют эмбрионы, находящиеся на стадии бластоцисты. Бластоцисту удерживают всасывающей пипеткой и, используя микроманипуляторы, в трофобласте путем проколов иглами zona pellucida делают отверстие, через которое инъецируют ВКМ донорского зародыша. Позднее удалось установить, что этим методом можно инъецировать не только ВКМ ранних эмбрионов, но и более дифференцированные клетки. Полученную химерную бластоцисту трансплантируют мыши-реципиенту.
Инъекционный метод нашел применение при получении межвидовых химер.
Для идентификации химерных животных применяют ряд маркеров. В качестве маркерных используют гены, контролирующие пигментацию, структуру волоса, антигенные, биохимические, морфологические и др. При получении химерных животных, происходящих от фенотипически контрастных пород или видов, широко используют морфологические маркеры.
Экспериментальные химеры млекопитающих. Создание химерных лабораторных млекопитающих. Первыми созданными и идентифицированными химерами были мыши между линиями агути и неагути (черная). Химеры оказались крапчатыми, причем агути (кремовый цвет) и черная окраска, перемешиваясь, формировали своеобразный узор (Mintz В., 1965). В дальнейшем было показано, что у экспериментальных химер, полученных из пигментированной и непигментированной линий, стержни некоторых волос были полностью пигментированы, другие — совсем лишены меланина, а третьи — оказались пятнистыми. Таким образом, в окраске мышей проявляется действие родительских генов с характерной различной степенью промежуточной экслрессии генов. Если химеризм затрагивает несколько локусов, влияющих на окраску шерсти, при образовании пигмента образуются фенотипические взаимодействия.
Получение агрегационных внутривидовых химер-мышей позволило установить, что организм химеры включает генотипически различные популяции клеток, т. е. представляет генетическую мозаику. Это позволяет анализировать механизм действия различных генов, особенно мутантных, в процессе онтогенеза млекопитающих (Конюхов Б. П., Платонов Е. С, 1985).
Химеры-мыши получены и инъекционным методом, использование которого углубило знания в проблеме детерминации клеток в онтогенезе. Например, показано, что чем позже стадия развития эмбриона, от которого взята ВКМ для инъекции в бластоцель, тем меньше вероятность получения химер, и, наконец, на основе инъекционного метода были получены новые данные для раскрытия механизма дифференцировки и малигнизации клеток. Обобщая эти работы, Б. В. Конюхов и Е. С. Платонов (1985) приходят к заключению, что, например, многие ранее «молчащие» в раковых клетках гены экспрессируются не только в онтогенезе мыши, но и у ее потомства. Следовательно, возникновение злокачественных новообразований, как подчеркивают авторы, может быть обусловлено изменением экспрессии нормального клеточного генома и нельзя рассматривать мутации как единственную причину малигнизации.
В связи с этим небезынтересно отметить, что при инъекции
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.
