Факторы и механизмы реактивности и резистентности организма: Методическая разработка для учебно-исследовательской работы студентов, страница 2

Для лечения ХЛЛ широко используются химиотерапевтические препараты, которые подавляют метаболические процессы и стимулируют апоптоз. Пациенты с ХЛЛ могут иметь различную чувствительность к цитостатическим препаратам. Часто в процессе лечения возникает резистентность, что приводит к неэффективности химиотерапии. Это может быть связано активацией синтеза белков, влияющих на транспорт и метаболизм лекарственных соединения в опухолевой клетке, например P-гликопротеина, кодируемого одним и из генов множественной лекарственной устойчивости. Блокированием апоптоза, индуцированного химиопрепаратами при мутациях гена р53 и сверхэкспрессии антиапоптотического гена Bcl-2, усилением в опухолевых клетках процессов репарации повреждений ДНК и других механизмов.

Методика проведения эксперимента

Опыт ставится на лимфоцитах, выделенных из периферической крови пациентов с хроническим В-клеточным лимфоцитарным лейкозом. Из венозной крови больных на градиенте плотности фиколл-верографин выделяют лимфоциты. Больной 1 находится на начальной стадии течения заболевания и не получает цитостатическую терапию. Больной 2 имеет развернутую стадию заболевания, частые рецидивы, наблюдается выраженный лейкоцитоз, лимфоцитоз.

Для выбора оптимальной схемы химиотерапии определяют чувствительность лимфоцитов периферической крови больного 1 и 2 к действию цитостатических препаратов. Лимфоциты культивируют в среде с добавлением различных концентраций препаратов. Оценку жизнеспособности клеток проводят по их метаболической активности с помощью МТТ-теста через 48 часов культивирования. Основным показателем МТТ-анализа является изменение метаболической активности лимфоцитов, выраженное в процентах от контрольного значения для интактных клеток. Для расчёта изменений жизнеспособности берётся среднее арифметическое значений, полученных в трёх дублях каждого разведения препарата. Результаты эксперимента регистрируются и протоколируются.

Результаты эксперимента

Тестируемый химиопрепарат

Жизнеспособность клеток, %

Наименование

Концентрация, мкг/мл

(*-терапевтическая)

Больной 1

Больной 2

 Интактные клетки (без х/п)

0

100,0±2,7

100,0±1,6

Флударабин

5*

40,2±0,9

57,9±5,1

Флударабел

0,125

78,4±1,3

88,9±1,7

0,25

74,4±2,5

88,7±2,1

0,5

70,5±1,8

87,1±0,8

1

69,9±1,3

82,6±1,3

2

66,7±2,9

70,1±1,0

2,5

60,2±2,7

65,3±2,1

5*

38,4±2,4

49,8±0,2

Лейкладин

0,125

62,1±1,1

91,9±1,6

0,25

48,6±5,4

89,9±1,1

0,5

41,3±0,8

83,3±2,2

1

42,3±3,2

79,6±4,5

2*

39±3,7

68,9±1,8

2,5

29,3±2,5

55,3±4,1

5

23,6±5,9

38,6±1,5

Доксорубицин

1*

51,3±3,7

81,1±0,9

Дексаметазон

5*

52,4±1,5

77,3±1,84

Винкристин

0,05*

54,6±4,7

82,2±1,55

Методическая разработка подготовлена аспиранткой МГЭУ им. А.Д.Сахарова Сергиенко Т.Ф. на основе результатов собственных экспериментов, доцентом кафедры экологической медицины и радиобиологии Меркуловой И.П.