Микроскопические методы анализа в лаборатории

возможность исследования как прозрачных, так и непрозрачных живых объектов

С помощью люминесцентных микроскопов проводят фенотипический анализ клеток периферической крови, костного мозга и тканей по наличию поверхностных антигенов с применением моноклональных антител.

n  Поляризационные микроскопы

Обеспечивают наблюдение на сером или темном фоне разноцветного, четкого или контрастного изображения. Обычный прямо проходящий свет с помощью полярофильтров поляризатора в осветительной системе превращается в имеющий одно преимущественное направление линейно-поляризованный свет.

Преимущества:

Ø  высокая степень контрастности и четкости изображения в поляризованных лучах;

Ø  визуализация объектов, невидимых в обычном свете и обладающих свойством анизотропии (двойного лучепреломления).

Анизотропные структуры (с упорядоченным расположением молекул - кристаллы, фибриллярные белки) становятся видимыми как ярко светящиеся на темном фоне.

Применяют при анализе состава почечных и желчных камней, гистологических срезов и др.

n  Лазерные микроскопы

Позволяют сканировать объект в трех измерениях и с помощью компьютера, сопоставляя до 20 срезов в разных позициях, формировать трехмерное изображение объекта, не давая, однако, точной цветопередачи. Предназначены для исследования объектов в трехмерном изображении на уровне разрешения, приближенного к электронной микроскопии с помощью лазерной системы, состоящей из 3 — 4 лазеров и комплексной системы светофильтров.

n  Преаналитический этап при микроскопии

Необходимо соблюдение техники приготовления мазка: тонкий, монослойный, без повреждения клеток, обеспечивающий раздельное расположение клеток 

Автоматические устройства для приготовления равномерных мазков:

v  Центрифугирование. Цитоцентрифуга концентрирует клетки на небольшой площади, и такие мазки используют для изучения клеток в низких концентрациях, например в спинномозговой жидкости.

v  Механическое распределение клеток с помощью специальных устройств. Требуют применения стандартных стекол. Предусмотрено в современных гематологических анализаторах.

n  Фиксация мазков

Фиксация необходима для придания клеткам стойкости к воде, содержащейся в краске, а также для коагуляции белка, что обеспечивает прикрепление клеток к стеклу.

Наиболее широко используемые фиксаторы:

v  метанол

v  этанол

v  10 % формалин и лиофилизация  - для фиксации срезов тканей,

v  глутаровый альдегид (0,5 % и 0,2 % растворы). для препаратов, исследуемых под электронным микроскопом

n  Окраска мазков

Позволяет изучить морфологию клетки.

Основана на химическом сродстве основных частей клеток к определенным анилиновым краскам. Структуры, содержащие щелочные компоненты, воспринимают кислые компоненты красок и наоборот. Ядра в значительном количестве содержат нуклеиновую кислоту и окрашиваются главным образом основными красками.

n  Особенности окраски мазков крови

Основные гематологические краски:

Ø  метиленовый синий и его производные азур 1 (метиленазур) и азур 2 (смесь равных частей азура I и метиленового синего) – основная составляющая

Ø  водорастворимый желтый эозин – кислая составляющая

Азур-эозиновые смеси обладают высокой чувствительностью к реакции красящей среды, поэтому применяемая для приготовления красящих растворов и для смывания их дистиллированная вода должна иметь нейтральную реакцию. При кислой реакции воды клетки долго не прокрашиваются и имеют красный оттенок, а при щелочной (чаще всего причиной щелочной реакции являются стекла, плохо отмытые от моющих средств) — эритроциты окрашиваются