Другие предметы \ Вирусология

Особенности топологии вируса свиного гриппа H1n1 в клетках головного мозга лабораторных животных и характер субклеточных изменений в них (Отчет о научно-исследовательской работе), страница 3

Целью же данной работы было выявление и изучение морфологических признаков проявления вируса гриппа H1N1 на тканевом и клеточном уровне в головном мозге, походу течения заболевания. Для этого были приготовлены и изучены микросрезы биоптатов головного мозга мышей на разных стадиях патогенеза вируса: 1 сутки, 3 суток, 6 суток, 10 суток и 21 сутки после заражения. После изготовления срезы были окрашены с применением различных методик для выявления клеточных структур.

Окраска гематоксилин-эозином включает использование основного красителя гематоксилина, окрашивающего базофильные клеточные структуры ярко-синим цветом, и спиртового кислого красителя эозина Y, окрашивающего эозинофильные структуры клетки красно-розовым цветом. Базофильные структуры, как правило, это те, которые содержат нуклеиновые кислоты клеточное ядро, рибосомы и РНК-богатые участки цитоплазмы. Эозинофильные структуры содержат внутри- и внеклеточные белки.

Метиленовый синий относится к основным красителям, то есть хромофором является катион. Благодаря этому краситель интенсивно связывается с ядерными компонентами клеток за счет образования комплекса с анионами ДНК и рибосомальной РНК бактерий. При окраске получается препарат синего цвета. Ядра клеток окрашены в синий цвет, цитоплазма — в голубой цвет разной интенсивности.

В методе Маллори используются 3 красителя, что делает картину многоцветной: коллагеновые волокна окрашиваются в темно-синий цвет; как и слизь, гиалин; ядра клеток, фибрин, эластин — в красный; цитоплазма, осевые цилиндры нервных волокон и нейроглия — в фиолетовый; эритроциты, мякотные оболочки нервов — в желтый или желто-красный; роговая субстанция— в ярко-красный; мышцы— в огненно-красный.

Результаты

1 сутки после заражения

На первые сутки мы можем наблюдать небольшой отек ткани вокруг сосудов, структура нейронов хорошо сохранена, микроглия не раздражена. Дегенеративные изменения незначительны, а имеющиеся можно считать следствием естественных процессов.Окраска Гематоксилин-Эозином

Снимок №1. Увеличение х40

На данной фотографии можно заметить отек вокруг сосуда, но он еще слабо выражен.

Клетки микроглии округлой формы, малоактивны.

Структура нейронов в хорошем состоянии.

Снимок №2. Увеличение х63

Ткань хорошо сохранена.

Нейроны не повреждены. Очень мало погибших нейронов и скорее всего это результат естественных процессов.

Можно заметить кровенаполненные мелкие сосуды.

Окраска по Малори

Увеличение х63

Хорошо видна структура нейронов.

Окраска Метиленовым синим

Увеличение х100

Нейроны

Изменения в клетках незначительны. В некоторых начинается тигролиз.

3 сутки после заражения

В данный период времени наблюдается увеличение периваскулярных отеков, начинается процесс воспаления, гранулоциты выходят за пределы сосудистого русла, активируются макрофаги, появляются крупные очаги инфильтрации. Атипичное появление геморрагий в ткани. Процесс тигролиза распространяется на все большее количество нейронов. Неестественно повышается уровень клеточного некроза. Замечены гранулярные скопления в ткани, что является косвенным доказательством присутствия вируса.

Окраска гематоксилин-эозином

Снимок №1. Увеличение х20

Виден периваскулярный отек.

Снимок №2. Увеличение х63

Выход клеточных элементов за пределы кровяного русла. Присутствуют макрофаг и нейтрофил, что свидетельствует об экссудативной фазе воспалительного процесса.