Оба сплава выражены в присутствии репортера ген. Если приманка и добыча не взаимодействуют, репортер, ген не включен на. Если они взаимодействуют, область активации и dna - ОБЯЗАТЕЛЬНАЯ область также соединена, формируя функциональный фактор транскрипции, который стимулирует выражение репортера ген. Система часто основывается, так рост дрожжей зависит от выражения репортера, что, дрожжи растут только, когда приманка и добыча взаимодействуют.
Так как основная двухгибридная техника была развита в конце 1980-ых, ученые улучшили и изменили это экстенсивно. " Есть много примеров условных взаимодействий белка-белка, где, например, закрепление двух белков к друг другу зависит от phosphorylation одного из белков, " Ветцтеин сказал. " Вы можете также раскрыть взаимодействия белка-белка, которые зависят от закрепления маленькой молекулы ligand или присутствия белка или RNA, который формирует мост между приманкой и добычей. Первоначальные возможности экрана двухгибридного дрожжей был расширены на эти модификации. "
Эрика А. Големис и коллеги в Центре Рака Преследования Лисы, Филадельфии, недавно развивали изменение(разновидность) двойной приманки системы двухгибридного дрожжей, которая анализирует два независимых взаимодействия белка-белка одновременно [ Biol. Жевать., 274, 17080 (1999)]. На proteomics конференции, Ilya Serebriisldi, партнер исследования в группе Големиса, объяснил, что система двойной приманки превосходит других при различении определенного от неопределенных взаимодействий. Например, это может быть используемым, чтобы идентифицировать два дискретных набора взаимодействующих белков против обширного второстепенного населения неопределенно взаимодействующих белков.
Возможно, наиболее известное недавнее изучение двухгибридного дрожжей было использование техники, чтобы создать первую карту взаимодействия белка-белка полных организм-что дрожжей, соответственно достаточно. Работа была выполнена Университетом Вашингтонского профессора генетики и Говарда Хугеса Медицинский исследователь Института Стэнли Фиелдс (первоначальный разработчик метода двухгибридного дрожжей); Председатель, Президент, и Чиновник(офицер) Руководителя Джонатан М. Ротберг CuraGen, Нью-Хейвена, Конна.; и коллеги [Характер(природа), 403, 623 (2000)].
Исследователи обнаружили 957 возможных взаимодействий белка-белка, вовлекающих 1,004 белок дрожжей. В изучении, метод двухгибридного дрожжей использовался в соединении с PathCall-ing технологией КураГена, автоматизированная система высокой производительности чтобы анализировать роли и отношения генов и белков в биологических тропах. С картой взаимодействия белка-белка дрожжей в руке, " теперь мы делаем Drosophila, " сказал КураГен bioinformatics директор Джеймс Найт. Работа Drosophila сделается в сотрудничестве с группами Джеральда М. Рубина, профессор генетики и развития и Говарда Хугеса Медицинский исследователь Института в Университете Калифорнии, Беркли, и Russell L. Финли младший, помощник профессора молекулярной медицины(лекарства) и генетики в Wayne Школе Государственного университета Медицины(лекарства), Детройта.
Взаимодействие наносит на карту и участки
Как только взаимодействия белка-белка были идентифицированы, сеть отношений более легка, чтобы визуализировать, если отношения намечены графически. Множество компаний развилось
Сложные(искушенные) системы для картографии взаимодействия и анализа.
Бесчисленная Генетика основала ProNet Диалоговый (http://www.myriad-pronetcom), Web-сайт, который показывает данные относительно человеческого белка-белка в _ teractions полученный из занятий(изучений) двухгибридного дрожжей, сообщенных в изданной литературе. Вхождения включают списки взаимодействия партнеры, На основе в Яве карты взаимодействия, и направляют связи к другим данным белка в публично доступных базах данных. На основе в Париже Hybrigenics также обеспечивает карты взаимодействий белка-белка, обнаруженных в экранах двухгибридного дрожжей (http://pim.Hybrigenics.com/pimriderlobby/PimRiderLobby.htm). Каждое взаимодействие оценено и дано счет надежности, в пределах от (высоко надежное взаимодействие) через E (вероятный экспонат), так что ученые могут
Центр на наиболее важных. Взаимодействующая область каждого белка идентифицирована и нанесена на карту.
Знание точно, которая область взаимодействует - хорошее начало для занятий(изучений) моделирования препарата(наркотика), сказал Фредерик Аллеманд, вице-президент для делового развития и маркетинга в Hybrigenics. Он отметил, что Hybrigenics исследователи недавно анализировали взаимодействия и функциональные отношения белков, кодируемых genome gastrointestinal патогенного Helicobacterpylori и нашли, что каждый H. pylori белок участвует в 3.6 взаимодействиях в среднем.
Стратегия для zeroing в на определенных участках, где взаимодействия белка-белка происходят, была развита Бургессом и коллегами в Университете Висконсина. Исследователи использовали, маркировал про _ tein исследования, чтобы обнаружить фрагменты, содержащие области взаимодействия интереса(процента).
Бургесс описал идентификацию 49-amino кислотного участка на Escherichiacoli RNA polymerase b ' подединица, в которой фактор транскрипции a70 связывает - взаимодействие, которое стимулирует фермент катализировать dna транскрипцию. До этого
Изучение, немного было известно о местоположении o70 обязательный участок на multisub - фермент единицы. Исследователи построили radiolabeled a70 исследование и использовали пачкающиеся эксперименты, чтобы определить, который фрагменты р ' исследование связывают с и который это не связывает с, таким образом сужая точный диапазон остатков, в которых взаимодействие происходит.
Бургесс говорит, что он и его коллеги теперь развивают более высоко очищенную обязательную модель и выполняют высокие занятия(изучения) экранирования производительности, чтобы идентифицировать составы, способные к запрещению этого взаимодействия. Такие агенты представили бы возможное лидерство для развития новых антибиотиков. " Маленькая молекула, которая связывает и запрещает взаимодействие a70 с p ', предотвратил бы RNA синтез в бактериях и таким образом предотвращать рост бактерий, " Бургесс сообщает C*EN.
Уважаемый посетитель!
Чтобы распечатать файл, скачайте его (в формате Word).
Ссылка на скачивание - внизу страницы.